174160. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kristályos inzulinból és oldott dez-fenilalanin-inzulinból álló antidiabetikus-inzulin-kombináció előállítására
3 174160 4 összesen 40-100 l.E./ml mennyiségben és 25—80 meg/100 l.E. cink-ionokat tartalmazó — készítmény pH-ját szükséges és kívánt esetben beállítjuk 6,8-7,2 értékre. A 2 256 215 számú Német Szövetségi Köztársaság-beli közrebocsátási iratban először ismertettünk olyan inzulin-készítményt, amely kristályos inzulin mellett azonos fajtájú (speeies-ű) amorf dez-fenilalanin-inzulint tartalmaz. Ebben a készítményben sikerült először két azonos fajtájú, de különböző készítményt összekeverni, és így olyan készítményt előállítani, amely relatív gyorsan hat és ugyanakkor eléggé stabil. Meglepő módon azt találtuk, hogy oldott dez-fenilalanin®1-inzulinból és azonos fajtájú kristályos inzulinból stabil kombinációt nyerhetünk anélkül, hogy az oldott dez-fenilalaninB -inzulin kristályos dez-fenilalaninB 1 -inzulinná alakulna, ha megfelelő mennyiségű cink-ionok vannak jelen. Mivel a dez-fenilalaninB1 -inzulin - a hiányzó fenilalanin részig - azonos immunogén csoportositású, mint a megfelelő kristályos inzulin, a két inzulin kétfázisú (kristályos/oldott) stabil rendszert képez, mely azonos immunológiai sajátságokkal rendelkezik. Az inzulin-kombináció stabilitására vonatkozóan döntő jelentőségű az oldatban és a kristály-szuszpenzióban levő osszcink-tartalom, amelynek 25 és 80 mcg/100 l.E. inzulin érték közé kell esnie. Mint ahogy a találmány szerinti eljárásból látható, a kristályos inzulin és az oldott dez-fenilalanin®1-inzulin aránya határozza meg az idő-hatás összefüggést. Ez a térfogatarány 60 : 40 és 90 : 10, előnyösen 80—20 és 90 :10. A készítmény összinzulin-tartalma célszerűen 40—100 l.E./ml. A szuszpenzió pH-ját 6,8—7,2, előnyösen 6,8 7,0 értékre állítjuk be és a szuszpenzió 1001.E.-nként 25—80 meg cink-iont tartalmaz. A következőkben részletesen tárgyaljuk a találmány szerinti eljáráshoz szükséges kiindulási anyagok, valamint az új inzulinkészítmény előállítását: 1. Kristályos inzulin-szuszpenzió előállítására (A kész készítmény kristályos komponense.) Az inzulint mindenek előtt egy cink-ionokat tartalmazó pufferből kristályosítjuk. Ily módon egységes, 15—35/i nagyságú, és 0,3—1,0% cink-tartalmú inzulin-kristályokat kapunk. A kristályokat az anyalúgtól elválasztjuk, majd puffer-oldatban szuszpendáljuk, amelynek a térfogatát úgy határozzuk meg, hogy a szuszpenzió meghatározott inzulin-tartalmú, mégpedig 40- 100 l.E./ml legyen. A puffer-oldat annyi cink-iont tartalmaz, például dnkklorid formájában, hogy az összes cink-tartalom a 40-1001.E./ml-re beállított kristály-szuszpenzióra vonatkoztatva 30-80 mcg/100 l.E. legyen. A puffer-oldat ezenkívül tartalmaz még sókat, például nátriumacetátot, célszerűen 0,5-1% koncentrációban, valamint konzerválószert, például 4-hidroxi-benzoesav-inetilésztert, célszerűen körülbelül 0,1% koncentrációban, és az így kapott puffer-oldat pH-ját naimim'ó.V oxid-oldattal 6,8-7,2. előnyösen b,8-7,0 értékre állítjuk be. 2. A kristályos inzulinnal azonos fajtájú dez-fenilalaninB 1 -inzulin-oldat készítése (A kész készítmény oldott komponense.) Olyan mennyiségű, a kristályos inzulinnal azonos fajtájú, kristályos, száraz, 0,3-0,7% cink-tartalmú dez-fenilalaninB 1-inzulint oldunk egy oldófolyadékban, hogy az oldat dez-fenilalaninB1-inzulin-tartalma egy meghatározott tartományba essék, mégpedig 40—100 l.E./ml legyen. Az oldófolyadék annyi cink-ion+ tartalmaz, például cinkklorid formájában, hogy az oldat összes cink-taitalma 25 40 mcg/1001.E. legyen. Az oldófolyadék ezenkívül nátriumkloridot és 4-hidroxi-benzoesav metilésztert, valamint a dez-fenilalaninB 1-inzulin feloldásához elegendő mennyiségű ecetsavat és sósavat tartalmaz. Steril szűrés után a dez-fenilalaninB1-inzulin-oldat pH-ját beállítjuk nátriumhidroxid-oldattal 6,8—7,2, előnyösen 6,8—7,0 értékre. Ez az oldat így az 1-ben leírt puffer-oldattal azonos mennyiségű nátriumkloridot, nátriumacetátot és 4-hidroxi-benzoesav-metilésztert tartalmaz. 3. Alkalmazásra kész, depó hatású inzulin-készítmény előállítása Az 1. pontban leírt kristályos komponenst és a 2. pontban leírt oldott komponenst elegyítjük, mimellett azonos fajtájú inzulin-kristályokat és oldott dez-fenilalaninB1-inzulint alkalmazunk. A kristályos komponens és az oldott komponens térfogatának aránya 60:40 és 90:10, előnyösen 80:70 és 90 :10. Az alkalmazásra kész készítmény inzulin-tartalma 40-100 l.E./ml, a cink-tartalma a két komponens keverési arányától függ és 25-80 mcg/1001.E. közötti érték, a pH-érték pedig 6,8—7,2, előnyösen 6,8—7,0. A találmány szerinti készítmény hosszantartó és kiegyensúlyozott inzulin — depó — hatással rendelkezik. Egy éves 4 °C-8 °C és 25 °C hőmérsékleten történő tárolás után is változatlanul megtartja fizikai állapotát és biológiai hatását. A készítményt depó-inzulinként diabetes mellitus kezelésére alkalmazhatjuk. A készítményt különösen olyan betegek újbóli inzulin-beállításáia használhatjuk, melyeknél félő, hogy a több inzulin-fajta elleni antitestek képződnek. A következő példák a találmány szerinti készítmények előállítását szemléltetik. 1. példa A) Kristályos marha-inzulin-szuszpenzió előállítása 16g, a száraz súlyra vonatkoztatva legalább 25 l.E./mg aktivitással rendelkező tiszta kristályos marha-inzulint feloldunk 750 ml 0,02 n sósav-oldat ban, amely 0,013% cink-iont tartalmaz cinkklorid 5 J0 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
