174137. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A—22082 jelű polipeptid antibiotikum előállítására
s 174137 6 közelítőleg ék alakúak. Hosszúságuk 3,2//-tól 6,3//-ig teljed, és átlagosan 4,4//. Legszélesebb pontjukon 2,8// szélesek. A másodlagos termőtestek palack-alakúak és hosszúkásak. Legszélesebb pontjukon átmérőjük 3,4// és az 1/z-os méretig keskenyednek. 4,7-7,9// hosszúak, átlagos hosszuk 6,2//. A konídiumok ráncosak, gömb alakúak, tömegben sárgától a zöldig terjedő színűek, átmérőjük I, 6// és 4,6// közé esik, átlagosan 2,5//. Az ascusos fokozatot a telep felszínén Hülle-sejtek veszik körül, de megtalálhatók a felszín alatti rétegekben is. A Hülle-sejtek üvegszerűek, és a deistotheciumok (termőtestek) fejlődése során a rózsaszínestől a barnásig terjedő színűvé válhatnak. A Hülle-sejtek gömb- vagy tojásdad alakúak, vagy az ovális és a hosszúkás alak közé esnek, és átmérőjük általában 14/z-tól 18//-ig terjed. A cleistotheciumok gömb alakúak, faluk vastag, fiatal korban üvegszerűek, teljesen kifejlett állapotban sötét bíborszínűek. Átmérőjük 185// és 320// közé esik, átlagosan 200//. Az ascusok üvegszerűek, gömb- vagy ovális alakúak, és a deistotheciumok beérése előtt széteshetnek. A gömb alakú ascusok átmérője 12,6//. Az ovális ascusok átlagos mérete 14,1//x 11,1// hosszúságuk 12,6// és 17,4// között, szélességük pedig 9,5// és 12,6// között változik. Az ascospórák fala sima, színük narancsszín, és két, finoman ráncolt, párhuzamos, az ascospórák vízszintes középsíkjában lefutó taréj díszíti őket, amelyek nem törnek meg, és szélességük 0,8//. Ha ez a taréj az ascospóra vízszintes középsíkjában helyezkedik el, akkor a 4,3—5,1// hosszú és 2,7—3,5// széles és átlagosan 4,5// x 3,2// méretű, lencse alakú ascospóra hosszanti tengelyén megy át. Ha a taréj az ascospóra felületén van, akkor az ascospóra gömb alakúnak látszik, és átmérője azonos a lencse alak hosszúságával. Malátakivonat-agar 25° C-on a tenyészet gyorsan nő, átmérője 10 nap alatt eléri az 5 cm-es értéket, és 3—4 hét alatt a 7 cm-es értékig nőhet. A telepek bársonyosak, színük sárgászöld. A hetedik napig megjelennek a Hülle-sejtek kis, fehér színű nyalábjai szabálytalan elrendeződésben a telep felszínén és a szegély mentén egy csíkban. A telep öregedése során a Hülle-sejtek színe tompa sárga lesz. A telep csipkézett szegélye mélyen a felszín alá benyúló sárgásbarna tufákból áll. A felszín általában halvány olívzöld színű (ISCC-NBS 125 és Maerz és Parii 24-L-l), és a telep hátoldala halvány olívbama (ISCC-NBS 107 és Maerz és Paul 15-L- 4). A konídiumos és ascusos fokozat néhány kivételtől eltekintve hasonló a Czapek-agaron megfigyelthez. A hólyagocskák kisebbek, átmérőjük 6,3// és 11,0// között van, és átlagosan 8,7//. A gömb alakú ascusok átmérője 11,0//, és az ascusok II, 1-12,6// hosszúak és 9,5-10,3// szélesek, és átlagos méretű ll,3x 10,1//. Az ascospórák átlagos mérete 4,0// x 3,2/z. Az A-22082 jelű antibiotikumot termelő Aspergillus nidulans NRRL 8112 törzs egyes jellemző tulajdonságai eltérnek a Raper és Fennel által leírt mikroorganizmus jellemző tulajdonságaitól, lásd fent. Az A-22082 jelű antibiotikumot termelő törzs spóratartói, konídiumai és Hülle-sejtjei kisebbek, konídiumnyelei és másodlagos síerigmatumai viszont valamivel nagyobbak, mint a másik törzsnél megfigyeltek. Az A-22082 jelű antibiotikumot termelő törzs kiválaszt egy váladékot, míg a Raper és Fennel által leírt nem. Az összes többi jellemző tulajdonság megegyezik az idézett leírásban találhatókkal, és ez megerősíti, hogy az A-22082 jelű antibiotikumot termelő mikroorganizmus egy új Aspergillus nidulans (Eidam) Wint. törzs. Az A—22082 jelű antibiotikumot termelő Aspergillus nidulans tenyészetét letétbe helyeztük a Northern Regional Research Laboratory-nál, U. S. Dept, of Agriculture, Agricultural Research Service, Peoria, Illinois 61604, ahol e törzs a törzsgyűjtemény részét képezi. Az Aspergillus nidulans tenyészet az NRRL 8112 számon hozzáférhető az érdeklődők számára. Az Aspergillus nidulans NRRL 8112 termel egy ismert vegyületet, a sterigmatocystint. A termékek kinyerése során a sterigmatocystint és az antibiotikum-komplexet együtt extraháljuk a fermentádó közegéből valamely poláros szerves oldószer segítségével. Kicsapásos módszerekkel különíthetjük el az antibiotikum-komplexet a sterigmatocystintől. Szilikagéllel töltött oszlopon való megkötés, majd ezt követő, acetonitril és víz 7:3 arányú elegyével végzett elúdó útján választjuk el az A-22082 jelű antibiotikumból és más, kisebb mennyiségben jelenlevő antibiotikum összetevőkből álló antibiotikum-komplexet a fermentációs közegben levő egyéb összetevőktől. A fermentlé A-22082 tartalmának 25%-a nyerhető ki. Szilikagéllel töltött oszlopon kromatografálva, eluensként acetonitril és viz 7:3 arányú elegyét használva különítjük el az A-22082 jelű antibiotikumot a többi, kisebb mennyiségben jelenlevő antibiotikum összetevőktől. Az Aspergillus nidulans tenyésztésére számos táptalaj alkalmas. A termelés gazdaságossága, az optimális termelés és a termék egyszerű kinyerése érdekében azonban bizonyos táptalajokat előnyben részesítünk. így például a nagy méretekben végzett fermentációnál előnyösen szacharózt használunk szénhidrát-forrásként, de használhatunk glükózt, maltózt, glicerint vagy más hasonlókat is. Nitrogénforrásként előnyösen enzimesen hidrolizált kazeint vagy kukoricalekvárt használunk. A táptalaj szervetlen sókat is tartalmazhat. Ilyenek a szokásos, nátrium-, magnézium-, kalcium-, ammonium-, klorid-, karbonát-, szulfát-, nitrát- és hasonló ionokat szolgáltató, vízben oldható sók. A táptalajnak ezenkívül tartalmaznia kell a mikroorganizmus növekedéséhez alapvetően szükséges nyomelemeket. Ezek a nyomelemek általában olyan mennyiségben fordulnak elő a táptalaj egyéb összetevőiben szennyezésként, amely elegendő a mikroorganizmus növekedéséhez. Ha a habzás problémát jelent, akkor a nagy méretekben végzett fermentálás közegéhez hozzáadhatunk kis mennyiségű (azaz 0,2 ml/liter) habzásgátló anyagot, például polipropilén-glikolt. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
