174137. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A—22082 jelű polipeptid antibiotikum előállítására
7 174137 II. táblázat 8 Nagyobb mennyiségű A-22082 jelű antibiotikum előállítását előnyösen süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények között, tartályfermentorban végezzük. Kisebb mennyiségű A—22082 jelű antibiotikumot rázott-lombik tenyészetből is nyerhetünk. Mivel egy nagyméretű tartályfermentomak a mikroorganizmus spóráival való átoltásakor az antibiotikum termelése általában csak késleltetve, a „lag”—szakasz (a szaporodás megindu- i lásáig eltelt idő) után indul meg, előnyösen vegetatív inokulumot (oltótenyészetet) használunk. Oly módon nyerhetjük a vegetatív inokulumot, hogy a mikroorganizmus spórás alakjával vagy micéliumával beoltunk egy kis mennyiségű táptalajt, és így a mikroorganizmus egy friss, jól szaporodó tenyészetéhez jutunk. Ezután átvisszük egy nagyobb tartályfermentorba a vegetatív inokulumot. A vegetatív inokulum előállítására használhatjuk ugyanazt a táptalajt, amelyet a tartályfermentorban is alkalmazunk, de más táptalajok is szóba jöhetnek. 20° C és 40° C közötti hőmérsékleten tenyészthetjük az Aspergillus nidulans-t. A mikroorganizmus 25—30° C-on termelik az A—22082 jelű antibiotikumot optimálisan. Ahogy ez a süllyesztett, levegőztetett fermentációs eljárásoknál szokásos, úgy levegőztetjük a tenyésztő közeget, hogy egy teljesen zárt edényben, turbinakeverővei mechanikusan kevertetve, csíramentes levegőt vezetünk bele. A mikroorganizmus akkor termeli az antibiotikumot hatékonyan, ha a táptalajban feloldott oxigén mennyisége a levegővel való telítettség 35%-ának, vagy ennél magasabb értéknek felel meg. A fermentálás során úgy követhetjük nyomon az A-22082 antibiotikum termelését, hogy a teljes tenyésztő közeg alkoholos extraktumainak antibiotikus aktivitását mérjük, mégpedig egy olyan mikroorganizmussal szemben, amelyről ismert, hogy érzékeny az adott antibiotikumra. Az A—22082 jelű antibiotikum kimutatására felhasználható egyik értékmérő mikroorganizmus a Candida albicans. Hagyományosan agar-lemezes, papírkorongos biológiai értékmérést végzünk. Általában a fermentálás harmadik napjától lehet biológiai aktivitást kimutatni. A legnagyobb mértékű antibiotikus aktivitás általában a negyedik és hatodik nap között mutatható ki az Aspergillus nidulans esetében. Spektrometriás mérések szerint a fermentlevek antibiotikum tartalma 25-100 mcg/ml. Az A-22082 jelű antibiotikum hasznos gombaellenes szer. In vitro vizsgálatokkal mutattuk ki az A-22082 jelű antibiotikum gombaellenes hatását. A hagyományos korong-diffúziós módszerrel mértük a gombaellenes hatást (6 mm-es csíkokat merítettünk az A-22082 jelű antibiotikumot tartalmazó oldatokba, majd a csíkokat a mérő mikroorganizmussal beoltott agarlemezekre helyeztük). A II. táblázatban foglaltuk össze a korongonkénti minimális gátló koncentráció-értékeket (MIC), amelyeknél az A—22082 jelű antibiotikum gátolta az adott mikroorganizmust. Mérő mikroorganizmus MIC (mikrogramm/korong) Candida albicans 0,625 Trichophyton 0,078 mentagrophytes Candida tropicalis 3,12 Az in vitro korong-diffúziós vizsgálatok azt is kimutatták, hogy az A-22082 jelű antibiotikum a Geotrichum candidum-ot és négy Microsporum fajt is gátol. In vivo vizsgálatokkal is kimutattuk az A-22082 jelű antibiotikum gombaellenes hatását. A Candida albicans-szal fertőzött egerek két dózis A-22082 jelű antibiotikum megvédte a Candida albicans-szal szemben. A védelem mértékéül az ED50 -érték (az a mg/kg egységekben mért tényleges dózis, amely az egerek 50%-át megvédi) [lásd W. Wick et al., J. Bacteriol. 81, 233-235 (1961)] szolgál. Az A-22082 jelű antibiotikum Candida albicans-szal szemben mutatott EDS0 -értéke egereken i. p. 30 mg/kg s s.c. 50 mg/kg. Egereket három napon át naponta kétszer 100-100 mg/kg-os adagban (összesen 600 mg/kg) i.p. vagy s.c. az A-22082 jelű antibiotikummal kezelve nem jelentkeztek akut toxikus tünetek. Ugyancsak nem észleltünk akut toxikus tüneteket, amikor egereket egy 24 órás időszakban háromszor 200—200 mg/kg-os dózisban (összesen 600 mg/kg) i.p. kezeltünk az A—22082 jelű antibiotikummal. Gombaellenes szerként parenterálisan adagoljuk az A-22082 jelű antibiotikumot, mégpedig általában valamely gyógyászatiig elfogadható vivőanyag vagy hígítóanyag kíséretében. Az A—22082 jelű antibiotikum dózisa számos tényezőtől függ, mint például az illető fertőzés természetétől és súlyosságától. A találmány szerinti eljárást a továbbiakban, a találmány oltalmi körének szűkítése nélkül, példákkal szemléltetjük. 1. példa A) Az A—22082 jelű antibiotikum előállítása az Aspergillus nidulans NRRL 8112 jelű törzs rázott - -lombikban végzett tenyésztése útján. Elkészítjük az Aspergillus nidulans NRRL 8112 jelű törzs egy tenyészetét, és a következő összetevőket tartalmazó ferdeagaron tartjuk összetevő Mennyiség (%) Paradicsompüré 2 Zabliszt (tápszer) 2 Agár 2 Ionmentesített víz 94 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
