174130. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 7-acilamido-3-(5-oxo-6-hidroxi-4,5-tihidro-1,2,4-triazin-3-il-tiometil)-3-cefem-származékok előállítására
13 174130 14 dék oldatot 54 g Sephadex G—10 oszlopra visszük és vízzel eluáljuk. Az első frakciót 25 ml-re választjuk, míg a következő frakciók mennyisége körülbelül 15 ml lesz. Az 5—8. frakciókat egyesítjük és az elegy pH-ját híg sósavval 1,5-re állítjuk be. A kicsapódott terméket szűréssel elkülönítjük, híg savval (pH = 1,5) mossuk és levegőn szárítjuk. Ily módon 2,19 g 7-a-(terc-butoxikarbonilamino)fenilacetamido-3-(4-metil-5-oxo-6-hidroxi-4,5-dihidro-l, 2,4-triazin-3- iltio)metil-3-cefem-4-karbonsavat kapunk bamássárga por alakjában: NMR DMSO d6 : 9,18 (d, 1H, 70-NH), 7,3 (bm, 5H, C6Hs), 5,71 (q, 1H, la-H), 4,05 (m, 2H, 3-CH2), 3,55 (m, 2H, 2-CH2), 3,27 (s, 3H, triazin N—CH3), és 1,36 ppm (b, 9H, tere.—C4H9). 2. példa 404 mg 1. példa szerinti terméket 4,5 ml acetonitrilben oldunk, bár tökéletes oldatot nem kapunk. Ezután 300 mg p-toluolszulfonsavat adunk az oldathoz, amely 5 perc alatt teljesen feloldódik és ekkor szilárd anyag kezd kiválni. Az elegyhez 1,5 óra múlva 0,5 ml vizet adunk és a pH-t telített, vizes ammóniumkarbonát-oldattal 5,0-re állítjuk be. Az acetonitril nagyobb részét rotációs bepárlóban eltávolítjuk, majd izopropilalkoholt adunk a maradékhoz keverés közben mindaddig, ameddig csapadékkiválást nem észlelünk. A csapadékot szűréssel elkülönítjük, szűrés közben újabb csapadékkiválást észlelünk, ezért a szűrletet keverés közben izopropilalkohollal hígítjuk, így további csapadék válik ki. Ezt a csapadékot szűréssel elkülönítjük, izopropilalkohol és víz elegyével mossuk és levegőn szárítjuk, így bamássárga port kapunk 0,18 g mennyiségben. Ezt a port nagyobb mennyiségű (2,0 g) kiindulási anyagból származó hasonló anyaggal keverjük, az egyesített anyagmennyiség így 1,23 g lesz. Ezt az anyagot 30 ml víz és 30 ml metanol elegyébe hidegen bekeverjük és az elegy pH-ját 1 n vizes nátriumhídroxiddal lassan 7,0-re növeljük. A szűrletet rotációs bepárlóban körülbelül 5 ml-re besűrítjük, a bepárlás későbbi szakaszában a habzás megelőzésére izopropilalkoholt adunk az elegyhez. A maradékot 28 g 1,5 cm nagyságú Sephadex G-10 oszlopra visszük, eluálószerként vizet használunk és 25 ml frakciókat fogunk fel. A 3-9. frakciókat egyesítjük, az egyesített frakciók pH-ját 3,5-re állítjuk és a kicsapódott terméket szűréssel elkülönítjük. A csapadékot sósavval 3,6 pH-ra savanyított vízzel mossuk és levegőn szárítjuk. Ily módon 620 mg 7-(a-amino)- fenilacetamido-3-(4-metil-5-oxo-6-hidroxi-4,5-dihidro-1,2,4-triazin-3-iltio)metil- 3-cefem-4-karbonsavat kapunk világosbarna por alakjában. NMR, TFA d, : 7,58 (b, 5H, C6H5), 5,96 (d, 1H, 7a-H), 5,75 (s, 1H, C6H5-CH), 5,21 (d, 1H, 6a—H), 4,43 (q, 2H, 3—CH2), 3,77 (b, 2H, 2-CH2), és 3,58 ppm (s, 3H, triazin N—CH3). 45 ml vízhez hozzáadunk 2,39 g (15 mól) 3-merkapto-4-metil-5-oxo-6-hidroxi4,5- dihidro-1,2,4-triazint. Az elegyet, amelynek a pH-ja 2,8 keverjük és a pH-t 13,4 ml In nátriumhidroxid hozzáadásával 7,25-re állítjuk. Ezután 6,79 g (15 mól) 7-mandulasavamido-3-acetoximetil-3-cefem-4-karbonsavat adunk az elegyhez és a pH-t 3,2-re állítjuk be. Az elegy pH-ját 14,8 ml In nátriumhidroxiddal, amelyet óvatosan adagolunk, 7,2-re állítjuk be. A keletkező reakcióelegyet 55° C-on 4,25 óra hosszat melegítjük, eközben a pH 5,85-re csökken. Ezt követően a pH-t 0,7 ml In nátriumhidroxid hozzáadásával 7,17-re állítjuk és az elegy melegítését 14,25 órán át folytatjuk. Eközben az elegy pH-ja 5,99-re változik, amelyet 1,45 ml In nátriumhidroxiddal 7,09-re állítunk. A reakcióelegyet összesen 20 óra hosszat tartó melegítés után jeges fürdőben lehűtjük, 120 ml vízzel hígítjuk 1 n sósavval a pH-t gyors keverés közben 1,5-re állítjuk. A keletkező csapadékot szűréssel elkülönítjük, híg sósavval (pH =1,5) mossuk és levegőn szárítjuk. Ily módon 5,28 g piszkosfehér port kapunk. Ezt az anyagot keverés közben 40 ml vízbe adagoljuk, miközben az elegy pH-ját 1 n nátriumhidroxiddal 6,7-re állítjuk be. A keletkező oldatot izopropilalkohol hozzáadása után betöményítjük rotációs bepárlóban az izopropilalkohol eltávolítása közben. Az elegy végső térfogata körülbelül 10 ml lesz. Az elegyet 110 g 2,5 cm magas Sephadex G-10 oszlopra visszük vízben. Az oszlopot vízzel eluáljuk és 15-16 ml-es frakciókat fogunk fel. Ezután négy frakciót vagy frakció-kombinációt készítünk, mégpedig az 5—6., a 7-8., a 9. és a 10—12. számú frakciókból. Az egyes frakciókat, illetve a négy frakció-kombinációt hűtés közben keverjük, mindegyik pH-ját 1,5-re állítjuk be 1 n sósavval. Ekkor mindegyik kombinációban csapadék képződik, amelyek mindegyikét külön-külön elkülönítjük szűréssel, ezeket híg savval (ph=l,5) mossuk és levegőn szárítjuk. Így piszkosfehér porokat kapunk (5—6. frakció: 1,26 g), (7-8. frakció: 0,84 g), (9. frakció: 0,31 g) és a (10-12. frakció: 0,41 g). A vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat (TLC) — thin-layer chromatography - azt mutatja, hogy mindegyik termék azonos, így ezeket egyesítjük, amikoris 2,82 g piszkosfehér port kapunk. Ezt az anyagot vízben oldjuk és az oldatot 1,5 pH-ra savanyítjuk. A csapadékot szűrjük és levegőn szárítjuk, ily módon piszkosfehér port kapunk. A port 25 ml tetrahidrofuránban oldjuk, az oldathoz keverés közben izopropilalkoholt adunk mindaddig, ameddig a térfogat összesen 200 ml nem lesz. Az elegyet ezután szűrjük és a szürlethez 50 ml izopropilalkoholt adunk. Ezután az elegyet keverjük és szűrjük, majd a szűrletet szárazra pároljuk és a maradékot 7-es pH-n vízben oldjuk. Az oldatot 1,5 pH-ra savanyítjuk, szűrjük és levegőn szárítjuk, így 7-mandulasavamido-3-(4-metil-5-oxo-6-hidroxi-4,5-dihidro-l,2,4-triazin- 3-iltio)metil-3- -cefem-4-karbonsavat kapunk, amely a kívánt termék. 3. példa 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
