173783. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nonapeptidaminok előállítására
31 173783 32 18. példa (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ile-Leu-Arg -Pio-NH-CH2 -CH3 előállítása a) B0C-D-Ile-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása BOC-D-Ile-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2 -CH3 -t állítunk elő a 16. a) példa szerinti módon 579 mg BOC-D-Ile-OH-ból, 1,14 g H-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH3-ból, 537 mg HONB-ből és 620 mg DCC-ből. Hozam: 0,9 g cím szerinti vegyület, olvadáspontja: 127—131 °C (bomlás). [c*]q3= —48,3° (c = 1,0, metanolban). Elemzési eredmények C30H5 5O8N9 összegképlet alapján: számított: C = 53,79%, N = 18,18%, H =8,27%, talált: C =53,81%, N = 18,65%. H =8,31%, b) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ile-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH3 előállítása 300 mg BOC-D-Ile-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2- CH3-t feloldunk 3 ml trifluorecetsavban, és az elegyet 25 percen át rázzuk szobahőmérsékleten. Ezután hozzáadunk 40 ml száraz étert, és a keletkező csapadékot szűréssel kinyerjük és szárítjuk. Ezt az anyagot szabad alakká alakítjuk oly módon, hogy a 16. b) példa szerinti módon 1 cm átmérőjű, 5 cm hosszú Amberlite IR-45 (szabad alak) oszlopon bocsátjuk át. A keletkező, részben védett tetrapeptidet, a H-D-Ile-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2-CH3-t (142 mg) 171 mg (Pyr)Glu-His-Trp- Ser-Tyr-OH-val, 67 mg HONB-vel és 77 mg DCC-vel reagál tatjuk, így részben védett nonapeptidet kapunk. Ezt a vegyületet Amberlite XAD-2 oszlopon tisztítjuk, majd 2 órán át 80-85 °C-on ónklorid-monohidrátot (SnCl2 • H2 O) 60%-os vizes hangyasavas oldatával kezeljük. A kapott terméket Amberlite XAD-2 oszlopon és karboximetilcellulózon végzett kromatografálással tisztítjuk. A fenti lépések azonosak a 16. b) példában leírt lépésekkel. Hozam: 93 mg cím szerinti vegyület [a]^s= -41,5° (c = 0,5, 5%-os vizes ecetsavban). Rf2=0,13, Rf3= 0,66. Aminosav analízis (6 n sósavval tioglikolsav jelenlétében végzett hidrolízis): His 0,98, Arg 1,00, Trp 0,89, Ser 0,91, Glu 0,95, Pro 1,00, Leu 1,00, Tyr 1,00, etilamin 1,01, Ile 1,00. 19. példa Hidrogénklorid-addíciós só előállítása 100 mg (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH3 nonapeptid-amidot feloldunk 10 ml 0,05 n vizes sósav-oldatban. A pepiid hidrogénklorid-addíciós sóját tartalmazó oldatot ezután állandó súly eléréséig liofilizáljuk. 103 mg sót kapunk, mely a következő jellemzőkkel rendelkezik: Rf2= 0,10, Rf3= 0,74, [a]2D5=-35,20° (c = 0,45, 5%-os vizes ecetsav-oldatban). Analízis eredmények: számított Cl = 5,6%, talált: Cl = 5,92% 20. példa Fémkomplex előállítása 50 mg az 1. példa szerinti eljárással előállított (Py r) Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH3 képletű nonapeptid-amidot lOOmgcink-kloriddal együtt feloldunk 50 ml vízben. Az oldat pH-értékét 0,2 n nátriumhidroxid-oldattal 7,4-re állítjuk be, és a kivált csapadékot centrifugálással összegyűjtjük és alaposan kimossuk hideg vízzel. A csapadékot szuszpenzió formájában 50 ml vízben eloszlatjuk. A termék minden, a szokásos vizsgálatokhoz használt, oldószerben oldhatatlan. 21. példa a) Injekciós készítmény előállítása Az irodalomból jól ismert eljárással a következő összetételű injekciós készítményt állítjuk elő: nonapeptid-amid, (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH3 20 pg fiziológiás só-oldat 2,0 ml b) Liofilizált ampulla Összetétel: nonapeptid-amid, (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Leu-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH3 25 pg mannitol 6,0 mg A fenti elegyet feloldjuk 2 ml vízben és az oldatot 30 percen át 90 °C-on tartjuk, majd ampullába töltve 30 percen át 90 °C-on tartjuk, majd ampullába töltve liofilizáljuk és az ampullát leforrasztjuk. 22. példa Az ovulációt indukáló hatás vizsgálata A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek néhány jellegzetes képviselőjének ovulációt indukáló hatását Fujino és munkatársai, Journal of Medicinal Chemistry, 16, (10) 1144-1147 (1973), módszerével vizsgáltuk. A kapott eredményeket a következő III. táblázatban foglaljuk össze. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
