173783. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nonapeptidaminok előállítására
29 173783 30 amiddal készített oldatához hozzáadunk 537 mg HONB-t, és 0°C-on 620 mg DCC-t. Az elegyet 3 órán át 0°C-on és 10 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd szűrjük. A szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk, és a maradékot 100 ml etilacetátban feloldjuk. Az oldatot 0,1 n sósavval, 5%-os nátriumhidrogénkarbonát-oldattal mossuk, vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk és bepároljuk. A maradékot petroléterrel triturálva cím szerinti nyersterméket kapunk, amelyet etilacetát-éter elegyből újra lecsapunk. Hozam: 1,1 g, olvadáspontja: 144-146 °C (bomlás). [a]p3= -43,7° (c=l,0, metanolban), Rf1 = 0,55. Elemzési eredmények C2 9HS308 N9 • 1/2 H20 összegképlet alapján: számított: C =52,39%, H =8,18%, N = 18,96%, talált: C = 52,40%, H = 8,32%, N = 18,52%. b) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Val-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH3 előállítása 5 ml trifluorecetsavban feloldunk 300 mg BOC-D-Val-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH3-t és az elegyet 30 percen át keverjük szobahőmérsékleten. Ezután hozzáadunk 50 ml száraz étert, a keletkező fehérszínű szilárd anyagot kinyerjük, és exszikkátorban csökkentett nyomáson nátriumhidroxid felett szárítjuk. Az anyagot feloldjuk 20 ml 20%-os vizes metanolban, és az oldatot 5 cm hosszú, 1 cm' átmérőjű Amberlite IR—45 (szabad alak) oszlopra visszük fel. Az oszlopot ugyanazzal az oldószerrel mossuk. Az elfolyó oldatot és a mosófolyadékokat egyesítjük, kis térfogatra bepároljuk és liofilizáljuk. Hozam: 165 mg. Az anyag 150mg-ját 168 mg (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-OH-val és 65 mg HONB-vel együtt feloldjuk 2 ml dimetilformamidban és az elegyet 0 °C-ra hűtjük. fHozzáadunk 75 mg DCC-t, és 2 órán át 0 °C-on és 12 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A reakcióelegyet szűrjük, és 50 ml etilacetáttal hígítjuk. A csapadékot szűrjük, szárítjuk és szilikagélen (4 g) végzett oszlopkromatográfiával tisztítjuk. Eluáláshoz az Rf2 oldószer rendszert használjuk. A védett nonapeptidet tartalmazó frakciókat egyesítjük, és szárazra pároljuk (140 mg). A védett nonapeptid llOmg-ját 4 ml vízmentes hidrogénfluoriddal kezeljük 1 órán át 0 °C-on 0,1 ml anizol és 0,2 ml 2-merkato-etanol jelenlétében. A hidrogénfluoridot csökkentett nyomáson eltávolítjuk, és a maradékot 20 ml vízzel extraháljuk. Az extraktumot éterrel mossuk és 1,5 cm átmérőjű, 3 cm hosszú Amberlite IRA—400 (acetát alak) oszlopra visszük fel, az oszlopot vízzel mossuk. Az elfolyó oldatot és a mosófolyadékokat egyesítjük és liofilizáljuk. Az anyagot kis mennyiségű vízben feloldjuk, és az oldatot 30 cm hosszú, 1,2 cm átmérőjű karboximetilcellulóz oszlopra visszük fel. Eluáláshoz lineáris gradiens technikával ammóniumacetát-oldatok sorozatát (0,005 m-0,2 m, 150ml-150ml) használjuk. A termék a 110ml-130ml frakciókban jelenik meg. Ezeket a frakciókat egyesítjük és liofilizáljuk. Hozam: 87 mg cím szerinti vegyület. [a]p3= -40,8° (c = 0,5, 5%-os vizes ecetsavban), Rf2=0,12, Rf3= 0,66. Aminosav analízis (6 n sósavval tioglikolsav jelenlétében végzett hidrolízis): His 1,00, Arg 1,02, Trp 0,85, Ser 0,95, Glu 0,98, Pro 1,02, Val 0,91, Leu 0,95, Tyr 1,00, etilamin 1,01. 17. példa (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Met-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH3 előállítása a) A BOC-D-Met-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2 -CH3 -t a 16. a) példa szerinti módon állítjuk elő 623 mg BOC-D-Met-OH-ból, 1,14 g H-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH3-ból, 537 mg HONB-ből és 620 mg DCC-ből. Hozam: 1,1 g cím szerinti vegyület, olvadáspont: 125—1.30 °C (bomlás). [a]p3=-51,5° (c=l,0, metanolban), Rf1 = 059. Elemzési eredmények C29H5308N9S összegképlet alapján: számított: C =50,64%, H =7,77%, N = 18,32%, S =4,65%, talált: C =50,51%, H=7,52%, N = 18,54%, S =4,30%. b) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Met-Leu-Arg-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása 300 mg BOC-D-Met-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH3-t feloldunk 3 ml trifluorecetsavban, és az elegyet 20 percen át keverjük szobahőmérsékleten. Ezután hozzáadunk 40 ml száraz étert, és a keletkező fehérszínű csapadékot szűréssel kinyerjük és szárítjuk. Ezt az anyagot szabad alakká alakítjuk oly módon, hogy a 16. b) példa szerinti módon 5 cm hosszú, lem átmérőjű Amberlite IR-45 (szabad alak) oszlopon bocsátjuk át. A keletkező, részben védett tetrapeptidet, a H-D-Met-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2-CH3-t (147 mg) 171 mg (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-OH-val reagáltatjuk 67 mg HONB és 77 mg DCC jelenlétében, így a részben védett nonapeptidet kapjuk. Ezt a vegyületet Amberlite XAE>—2 oszlopon tisztítjuk, majd 2 órán át 80—85 °C-on SnCl2 • H2 O 25%-os vizes hangyasavas oldatával kezeljük. A kapott végterméket Amberlite XAD—2 oszlopon és karboximetilcellulózon végzett kromatografálással tisztítjuk. Ezek a lépések a 16. b) példában leírt lépéseknek felelnek meg. Hozam: 79 mg cím szerinti vegyület. [“In5* -39,6° (c = 0,5, 5%-os vizes ecetsavban), Rf*=0,16. Aminosav analízis (6 n sósavval tioglikolsav jelenlétében végzett hidrolízis): His 1,02, Arg 1,00, Trp 0,90, Ser 0,89, Glu 1,00, Pro 1,00, Met 0,91, Leu 0,98, Tyr 1,02, etilamin 1,00. Iá , 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
