173783. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nonapeptidaminok előállítására
27 173783 28 frakciókat csökkentett nyomáson bepároljuk és liofilizáljuk. A kapott védett terméket feloldjuk 7 ml 60%-os vizes hangyasavban és hozzáadunk 450 mg ónklorid-monohidrátot (SnCl2 • H20). Az elegyet 2 órán át melegítjük 80-85 °C-on. Az oldhatatlan anyagokat kiszűrjük, és a szűrletet csökkeritett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot 30 ml meleg vízzel (80 °C) extraháljuk. Az extraktumot szűrjük és a szűrletet 1,8 cm átmérőjű, 15 cm hosszú Amberlite XAD-2 oszlopra visszük, melynek szemcsemérete 200—300 mesh, az oszlopot vízzel jól kimossuk. Eluáláshoz lineáris gradienstechnikával vizes etanol-oldatok sorozatát (20-80%, 250-250 ml) használjuk. A termék a 100 ml-230 ml frakciókban jelenik meg. Ezeket a frakciókat összegyűjtjük és az etanol eltávolítása céljából csökkentett nyomáson bepároljuk. A koncentrátumot 1,2 cm átmérőjű, 40 cm hosszú karboximetilcellulóz oszlopra visszük fel, és a terméket lineáris gradiens technikával eluáljuk vizes ammóniumacetát oldatok sorozatával (0,005 mól—0,2 mól ammóniumacetát, pH 6,8, 200—200 ml). A cím szerinti peptid a 180-290 ml frakciókban jelenik meg. Ezeket a frakciókat összegyűjtjük és liofilizáljuk. Hozam: 130 mg cím szerinti vegyület. [a]p3= -39,2° (c = 0,5, 5%-os vizes ecetsavban) Rf^O.ll. Aminosav analízis (6 n sósavval tioglikolsav jelenlétében végzett hidrolízis): His 0,97, Arg 1,02, Trp 0,92, Ser 0,94, Glu 1,00, Pro 1,05, Ile 1,00, Leu 1,00, Tyr 0,97. 15. példa (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Nle-Arg-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása a) Z-Nle-Arg(N02)-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása 10 ml 25%-os hidrogénbromid-jégecetben feloldunk 715 mg Z-Arg(N02>Pro-NH-CH2-CH3-t és az elegyet 30 percen át keverjük szobahőmérsékleten. Ezután hozzáadunk 250 ml száraz étert, a keletkező csapadékot szűréssel összegyűjtjük, és exszikkátorban nátriumhidroxid felett szárítjuk. A kapott port 400 mg Z-Nle-OH-val együtt feloldjuk 15 ml dimetilformamidban, és az oldatot 0 °C-ra hűtjük. Ezután hozzáadunk 0,45 ml trietilamint, majd 295 mg HONB-t és 340 mg DCC-t. Az elegyet 3 órán át 0°C-on és 10 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A reakcióelegyet a 14. a) szerinti módon dolgozzuk fel. Hozam 824 mg cím szerinti vegyület, olvadáspont: 109-110 °C. [alD2=-50,4 (c = 0,5, etanolban) Rf' = 0,41. Elemzési eredmények C27H4207Ng • 1/2 H20 összegképlet alapján: számított: C = 54,08%, H = 7,23%, N = 18,68%, talált: C = 53,79%, H = 7,09%, N = 18,34%. 1A b) Z-D-Lei-Nle-Arg(N02 >Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása 5 ml 25%-os hidrogénbromid-jégecetben feloldunk 590 mg Z-Nle-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2-CH3-t és az elegyet 40 percen át rázzuk szobahőmérsékleten. Ezután hozzáadunk 200 ml száraz étert, a keletkező csapadékot szűréssel összegyűjtjük és exszikkátorban nátriumhidroxid felett szárítjuk. A terméket feloldjuk 5 ml dimetilformamidban és az oldatot 0°C-on 0,14 ml trietilaminnal semlegesítjük. Hozzáadunk 264 mg Z-D-Leu-OH-t, 216 mg HONB-t, majd 0 °C-on 247 mg DCC-t. Az elegyet 2 órán át keverjük 0°C-on és 10 órán át szobahőmérsékleten, majd a 14. b) példa szerinti módon járunk el. Hozam: 594 mg, cím szerinti vegyület, melynek olvadáspontja: 101-103 °C. [a]p3= -45,2° (c = 0,5, metanolban), Rf’ = 0,55. Elemzési eredmények C33H5308N9 • H20 összegképlet alapján: számított: C = 54,91%, H = 7,68%, N = 17,47%, talált: C = 54,63%, H = 7,54%, N = 17,08%. c) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Nle-Arg-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása 4 ml 25%-os hidrogénbromid-jégecetben feloldunk 350 mg Z-D-Leu-Nle-Arg(N02 )-Pro-NH-Ch2-CH3-t és az elegyet 40 percen át keverjük szobahőmérsékleten. Ezután hozzáadunk 300 ml száraz étert, a keletkező csapadékot szűréssel összegyűjtjük, és exszikkátorban nátriumhidroxid felett szárítjuk. A kapott anyagot 2 ml vízben feloldjuk és az oldatot 1,2 cm átmérőjű és 7 cm hosszú Amberlite IR-45 (szabad alak) oszlopon bocsátjuk át. Az oszlopot vízzel jól kimossuk. Az elfolyó oldatot és a mosófolyadékokat összegyűjtjük és liofilizáljuk. Ezt a terméket 6 ml dimetilformamidban 180 mg HONB és 206 mg DCC jelenlétében 345 mg (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-OH-val kapcsoljuk. Az elegyet feldolgozzuk és a 14. c) példa szerinti módon Amberlite XAD—2 oszlopon kromatografálva tisztítjuk. A nitrocsoport eltávolítását és a peptid tisztítását szintén a 14. c) példa szerinti módon végezzük. Hozam: 213 mg cím szerinti vegyület. [crß3= -38,6° (c = 0,5, 5%-os vizes ecetsavban), Rf2= 0,10. Amrnosav analízis (6 n sósavval tioglikolsav jelenlétében végzett hidrolízis): His 0,98, Arg 1,00, Trp 0,91, Ser 0,95, Glu 1,00, Pro 1,08, Leu 1,00, Nie 1,00, Tyr 0,96. 16. példa (Pyr)Glu-His-Trp- Ser-Tyr-D-Val-Leu-Arg-Pro-NH-CH2 -CH3~ előállítása a) BOC-D-Val-Leu-Arg(N02 >Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása 540 mg BOC-D-Val-OH (olaj) és 1,14 g H-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2 -CH3 10 nú dimetilform-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
