173783. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nonapeptidaminok előállítására
25 173783 26 10 ml trifluorecetsavban feloldunk 657 mg BOC-D-Thr-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH3-t és az 5 oldatot 40 percen át rázzuk. Ezután hozzáadunk 60 ml étert és a keletkező csapadékot leszűrjük, 30 ml vízben feloldjuk. A vizes oldatot 1 cm átmérőjű, 10 cm hosszú Amberlite IR-45 (szabad bázis) oszlopon bocsátjuk keresztül, majd 30%-os 10 vizes metanollal mossuk. Az elfolyó oldatokat és mosófolyadékokat összegyűjtjük és csökkentett nyomáson a metanol eltávolítása céljából betörnényítjük, a maradékot liofilizáljuk. így 471 mg D-Thr-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2 -CH3 -t kapunk. 15 Ennek a terméknek 167 mg-ját és 175 mg (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-OH-t feloldunk 2 ml dimetilformamidban, majd hozzáadunk 67 mg HONB-t. Az elegyet —5 °C-ra hűtjük, és hozzáadunk 77 mg DCC-t. Az elegyet 3 órán át -5 °C-on, majd 20 10 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Az oldhatatlan anyagokat kiszűrjük, és a szűrlethez 50 ml etilacetátot adunk. A keletkező csapadékot szűréssel kinyerjük, és dimetilformamid-etilacetát elegyből újra kicsapjuk. Hozam: 290 mg védett pepiid. 25 A termék 160 mg-ját feloldjuk 10 ml 60%-os vizes hangyasavban és 2 órán át kezeljük 80 °C-on 400 mg ónklorid-monohidráttal (SnCl2 • H2 O). Ezután a reakcióelegyet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. Hozzáadunk 10 ml vizet, és az 30 oldhatatlan anyagokat kiszűrjük. A szűrletet Amberlite XAD—2, karboximetilcellulóz és Biogel P—2 segítségével kromatográfiásan tiszti tjük. Hozam: 65 mg cím szerinti vegyület. [a]p - -37,4° (c = 0,5, 5%-os vizes ecetsavban), Rf2=0,12, 35 Rf3= 0,68. Aminosav analízis (6 n sósavval tioglikolsav jelenlétében végzett hidrolízis): His 1,00, Arg 0,97, Trp 0,94, Thr 1,03, Ser 0,90, Glu 1,00, Po 1,06, Leu 1,06, Tyr 1,00, etilamin 1,10. 40 14. példa (Py r)Glu-His-T rp-Ser-T y r- D-Leu-Ile-Arg-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása 45 a) Z-Ile-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH3 előállítása 12 ml 25%-os hidrogénbromid-jégecetben fel- 50 oldunk 1,43 g Z-Arg(N02 >Pro-NH-CH2 -CH3 -t és az elegyet 40 percen át rázzuk szobahőmérsékleten. Az oldathoz hozzáadunk 300 ml száraz étert és a keletkező csapadékot szűréssel összegyűjtjük, majd nátriumhidroxid felett exszikkátorban szárítjuk. A 55 kapott port 25 ml dimetilformamidban feloldjuk, az oldatot 0,84 ml dietilaminnal semlegesítjük és 0 °C-ra hűtjük. Ezután hozzáadunk 795 mg Z-Ile-OH-t, 590 mg HONB-t és 680 mg DCC-t, majd az elegyet 5 órán át 0°C-on és 8 órán át szobahő- 60 mérsékleten keverjük. A reakcióelegyet szűrjük, és a szűrletet be pároljuk. A maradékot 100 ml kloroformban feloldjuk, 0,1 n sósavval, 5%-os nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és vízzel mossuk, majd vízmentes magnéziumszulfát felett szárítjuk. Az 65 b) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Thr-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH3 előállítása oldószer lepárlása után a maradékot etilacetát-éter elegyből lecsapjuk. Etanol-éter elegyből újra lecsapva 1,1 g cím szerinti terméket kapunk, olvadáspontja: 103-105 °C. [a]£j3=-58,1° (c=l,0, metanolban), Rf1= 0,48. Elemzési eredmények C2 vH^CLNg • 1/2 H20 összegképlet alapján: számított: C = 54,08%, H = 7,23%, N = 18,68%, talált: C =53,80%, H=7,15%, N = 18,84%. b) Z-D-Leu-Ile-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása 4 ml 25%-os hidrogénbromid-jégecetben feloldunk 590 mg Z-Ile-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH3-t és az elegyet 40 percen át szobahőmérsékleten keverjük. Az oldathoz hozzáadunk 50 ml száraz étert, a keletkező csapadékot szűrjük és nátriumhidroxid felett exszikkátorban szárítjuk. A kapott port 8 ml dimetilformamidban feloldjuk, az oldatot 0,14 ml trietilaminnal semlegesítjük és 0 °C-ra hűtjük. Hozzáadunk 264 mg Z-D-Leu-OH-t 216 mg HONB-t és 247 mg DCC-t, 2 órán át 0 °C-on és 12 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A reakcióelegyet az a) lépésben ismertetett módon feldolgozva 620 mg cím szerinti terméket kapunk, olvadáspontja: 112-113 °C. [oí]d3=-47,8° (c = 0,5, metanolban), Rf^O.53. Elemzési eredmények C33Hs308N9 • H20 összegképlet alapján: számított: C = 54,91%, H = 7,68%, N = 17,47%, talált: C =54,72%, H =7,52%, N = 17,19%. c) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Ile-Arg-Pro-NH-CH2-CH3 előállítása 3 ml 25%-os hidrogénbromid-jégecetben feloldunk 220 mg Z-D-Leu-Ile-Arg(N02)-Pro-NH-CH2- -CH3-t és az oldatot 50 percen át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután hozzáadunk 50 ml száraz étert, a csapadékot szűréssel összegyűjtjük, és exszikkátorban nátriumhidroxid felett szárítjuk. Ezután kis mennyiségű vízben feloldjuk és 7 cm hosszú, 1,2 cm átmérőjű Amberlite IR—45 (szabad alak) oszlopon bocsátjuk át. Az elfolyó oldatot és a mosófolyadékokat egyesítjük és liofilizáljuk. Az anyagot feloldjuk 230 mg (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-OH-val és 108 mg HONB-vel 5 ml dimetilformamidban. Az elegyet -10°C-ra hűtjük, és hozzáadunk 124 mg DCC-t. Az elegyet 2 órán át — 10°C-on, 2 órán át 0 °C-on és 10 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd szűrjük. A szűrletet bepároljuk és a maradékot 1,8 cm átmérőjű, 20 cm hosszú 200-300 mesh szemcseméretű Amberlite XAD-2 oszlopon tisztítjuk gradiens eluálással, (250 ml 5%-os vizes etanol-oldat (250 ml 80%-os vizes etanol-oldat). A termék a 150ml-300ml frakciókban jelenik meg. Ezeket a 13
