173783. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nonapeptidaminok előállítására
23 173783 24 keletkező csapadékot szűréssel kinyerjük, és 0,1 ml anizol és 0,1 ml 2-merkapto-etand jelenlétében 1 órán át kezeljük 0 °C-on 4 ml vízmentes hidrogéniluoriddal. Ezután a hidrogéníluoridot csökkentett nyomáson lepároljuk, a maradékot jól megszárftjuk, és 10 ml vízben feloldjuk. Az oldatot Amberlite IRA—410 (acetát alak) ^oszlopon futtatjuk, és az elfolyó oldatot 25 cm hosszú, 1,5 cm átmérőjű karboximetücellulóz oszlopon adszorbeáljuk és gradiens eluálást végzünk 0,005 m ammónium-acetáttal (200 ml) és 0,15 m ammónium-acetáttal (200 ml). A 147 ml-168 ml frakciókat összegyűjtjük és liofilizáljuk, így a cím szerinti tiszta végterméket kapjuk. Hozamí 40 mg. (a]p2= -42,2° (c = 0,5, 5%-os vizes ecetsavban). Rfí= 0,11, Rf3= 0,755. Aminosav analízis (6 n sósavval tioglikolsav jelenlétében végzett hidrolízis) His 1,05, Arg 1,00, Trp 0,93, Ser 0,89, Tyr 1,00, Glu 1,00, Pro 1,02, Leu 1,00, Nie 1,00, etilamin 1,05. 12. példa (Pyr)Glu-His-T rp-Ser-Phe-D-Phe-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH3 előállítása a) H-D-Phe-Leu-Arg(N02>Pro-NH-CH2-CH3 előállítása 10 ml diklórmetán és 1 ml dimetilformamid elegyéhez hozzáadunk 600 mg Z-D-Phe-OH-t, 500 mg HONB-t és 950 mg H-Leu-Arg(N02>Pro-NH-CH2-CH3-t és az elegyet melegítjük. Ezután 0°C-ra hűtjük, és hozzáadunk 500 mg DCC-t. Az elegyet 4 órán át szobahőmérsékleten keveijük, és a diciklohexil-karbamid mellékterméket szűréssel eltávolítjuk. A szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk, és a maradékot kloroformban feloldjuk. Az oldatot kétszer 4%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és kétszer vízzel mossuk, vízmentes magnéziumszulfát felett szárítjuk, és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot azonnal feloldjuk 2 ml jégecetben. 5 ml 25%-os hidrogénbromid-jégecet hozzáadása után az elegyet 1 órán át keveijük szobahőmérsékleten, majd hozzáadunk 50 ml száraz étert. A kivált csapadékot szűréssel kinyerjük, éterrel jól kimossuk és szárítjuk. A csapadékot 10 ml 30%-os vizes metanolban feloldjuk. Az oldatot Ambeiiite IRA—410 (szabad alak) oszlopon futtatjuk, és 100 ml 30%-os vizes metanollal eluáljuk. Az elfolyó oldatot összegyűjtjük, és a metanol eltávolítása céljából betöményítjük. A maradék liofilizálásával kapjuk a kívánt terméket fehérszínű por alakjában.^ Hozam: 1,67 g cím szerinti vegyidet [a]^6= —94,26° (c = 0,l, metanolban). Elemzési eredmények C2 3 H4 j 0$ N9 • H2 O összegképlet alapján: számított: C =54,09%, H =7,62%, N = 20,28%, talált: C =53,84%, H =7,79%, N = 19,91%. 6 ml dimetilformamidban feloldunk 290 mg (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-OH-t és 240 mg H-D-Phe-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH3-t, majd hozzáadunk 150 mg HONB-t. Az elegyet -10°C-ra hűtjük, és hozzáadunk 90 mg DCC-t. Az elegyet 2 órán át keveijük -10 °C-on, 2 órán át 0 °C-on és 6 órán át szobahőmérsékleten. A diciklohexil-karbamid mellékterméket kiszűrjük, és a szűrlethez 40 ml étert adunk. A kivált csapadékot szűréssel kinyerjük, etanolból és etilacetátból újra kicsapva nyers védett pepiidet kapunk. (510 mg). A nyers pepiidet feloldjuk 40 ml 60%os vizes hangya savban. Az oldathoz hozzáadunk 1 g ónklorid-monohidrátot (SnCl2 • H20), és az elegyet 2 órán át 80—85 °C-on állni hagyjuk, majd csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékhoz 50 ml vizet adunk, és pH-ját vizes ammónia-oldattal 7,0-ra beállítjuk. A kivált csapadékot szűréssel eltávolítjuk. A szűrletet Amberlite XAD—2 és karboximetücellulóz oszlopon tisztítjuk, és az 1. példa szerinti módon liofilizáljuk. A cím szerinti terméket fehérszínű pelyhes por alakjában kapjuk. Hozam: 392 mg. [a]^6 =-71,8° (c = 0,195, 5%-os vizes ecetsavban), Rf2=0,14, Rf3=0,76. Aminosav analízis (6 n sósavval tioglikolsav jelenlétében végzett hidrolízis): His 0,98, Arg 1,00, Trp 0,97, Ser 0,93, Glu 1,00, Pro 0,98, Leu 1,00, Phe 1,96. b) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-D-Phe-Leu-Arg-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása 13. példa (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Thr-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH3 előállítása a) BOC-D-Thr-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása 10 ml acetonitrilben feloldunk 438 mg BOC-D-Thr-OH-t (olajszerű anyag) és 418 mg HONB-t, majd hozzáadunk 912 mg H-LeU-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH3-t. Az elegyet 0 °C-ra hűljük és hozzáadunk 494 mg DCC-t. Az elegyet 10 órán át szobahőmérsékleten keveijük, és az oldhatatlan anyagokat szűréssel eltávolítjuk. A szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk, és a maradékot 100 ml etilacetáttal extraháljuk. Az extraktumot 5%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, 10%-os vizes dtromsav-oldattal és vízzel mossuk a fenti sorrendben, majd vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk. Ezután csökkentett nyomáson szárazra pártájuk, és a maradékot etand-éter elegyből bepárlással kinyerjük. Hozam: 900 mg, olvadáspont: 119-121 °C (bomlás), (a&4=-38,6 (c = 0,5, metandban), Rf^ 0,45. Elemzési eredmények C21H5 j O9N9I • h2 0 összegképlet alapján: számított: C =49,76%, H «7,90%, N = 18,65%, talált: C =49,64%, H =7,70%, N -18,46%. s 10 15 20 25 30 35 40 45 50 SS 60 65 12
