173783. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nonapeptidaminok előállítására
3 173783 4 helyettesítve, példaképpen megnevezzük a metil-, etil-, n-propil-, i-propü-, hidroxi-metil-, 1-hidroxietil-, 2-hidroxietil-, 2-hidroxi-n-propil, 3-hidroxi-n-propil, 2,2-dihidroxi-i-propilcsoportot vagy hasonlókat. Sok éve ismert, hogy a hipotalamus olyan faktorokat tartalmaz, amelyek magasabb szinten szabályozzák a tropin hormonok kiválasztását a hipofízis-bői. Az utóbbi időben a tirotropint felszabadító hormon (TRH) izolálását követően egy olyan hormont, amely elősegíti aluteinizáló hormon kiválasztását, extraháltak tiszta alakban disznókból és juhokból, ez a hormon dekapeptid szerkezetű: (Pyr)Glu-H is-T rp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 [Schally, A. V. és munkatársai: Biochem. Biophys. Res. Commun., 43, 1334 (1971), Guillemin, R. és munkatársai: Proc. Nat. Acad. Sei., USA, 69, 278 (1972)]. Ezt követően számos hasonló pepiidet szintetizáltak, és biológiai próbákat is végeztek ezeken az analóg szerkezetű peptideken. A fenti peptid aminosav összetételén végzett kis módosítás is azonban komolyan lerontja a peptid fiziológiai aktivitását, és azt tartották, hogy a maximális fiziológiai aktivitás létrejötte szempontjából a fenti kémiai szerkezet a döntő [Schally, A. V. és munkatársai: Biochem. Biophys. Res. Commun., 4, 366 (1972)]. Kísérleteink során sikerült az I általános képletű nonapeptid-amid-származékokat előállítani, és meglepődve tapasztaltuk, hogy ezek a vegyületek sokkal erősebb ovulációt indukáló hatásúak, mint a természetben előforduló dekapeptid. Azt találtuk, továbbá, hogy ezek a vegyületek a hipofízisre hatnak, hogy elősegítsék mind a luteinizáló hormon, mint a tüsző-stimuláló hormon elválasztását. Azt találtuk továbbá, hogy ezek a vegyületek nemcsak értékes embergyógyászati szerek, például a hipofízis funkció diagnosztizálására vagy a gonadotropin hiány és amenorrhea kezelésére, hanem az állatgyógyászatban is alkalmazhatók, különösen állattenyésztési célra. A találmány célja tehát olyan I általános képletű új nonapeptid-amid-származékok, illetve ezek savaddíciós sóinak vagy fémkomplexeinek előállítása, amelyek erős ovulációt indukáló hatást mutatnak. Az I általános képletű nonapeptid-amid-származékokat úgy állítjuk elő, hogy valamely (A) reagenst, amely L-piroglutaminsav vagy egy olyan peptid fragmens, amely láncvégi nitrogénatomján L-piroglutaminsav-egységet [azaz (Pyr)Glu-] tartalmaz és ugyanakkor onnan legfeljebb az -NH-R4- -csoportig a fenti aminosav-szekvenciát tartalmazza, valamely (B) reagenssel kondenzálunk, amely reagens egy olyan amin-komponens, amely az I általános képletű nonapeptid-amid-származék legfeljebb a (Pyr)Glu-csoportig terjedő részének felel meg, mimellett az (A) és (B) reagens kívánt esetben egy vagy több védőcsoporttal lehet védve, majd a kapott termékről adott esetben a védőcsoportot vagy csoportokat eltávolítjuk és/vagy kívánt esetben a kapott nonapeptid-amidot önmagában ismert módon valamely savaddíciós sójává vagy fémkomplexévé alakítjuk. így az (A) reagens L-piroglutaminsav vagy valamely olyan peptid fragmens, amely a láncvégi nitrogénatomján egy L-piroglutaminsav-egységet tartalmaz és ugyanakkor onnan legfeljebb az NH-R*-csoportig az I általános képletű aminosavszekvenciát tartalmazza, és az (A) reagenssel kondenzáló (B) reagens egy olyan amin-komponens, amely az I általános képletű nonapeptid-amid-származék legfeljebb a (Pyr)Glu-csoportig terjedő részének felel meg, és az (A) és (B) reagensek adott esetben védettek lehetnek. Az (A) és (B) reagensek néhány jellegzetes kombinációját az alábbi I. táblázatban adjuk meg. I. táblázat 2 .S G H á ao A M A oá B 1 (Pyr)Glu-OH H-His-Trp-Ser-Ri -R2 -R3 -Arg-Pro-NH-R4 2 (Pyr)Glu-His-OH H-Trp-Ser-R, -R2 -R3 - -Arg-Pro-NH-R4 3 (Pyr)Glu-His-Trp-OH H-Ser-Ri -R2 -R3 -Arg-Pro-NH-R* 4 (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-OH H-Ri -R2 -R3 -Arg-Pro-NH-R4 5 (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Ri -OH H-R2 -R3 -Arg-Pro-NH-R4 6 (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Rj -R2 -OH H-R3-Arg-Pro-NH-R4 7 (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Rj -R2 -R3 -OH H-Arg-Pro-NH-R» 8 (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Ri -R2 -Rb -Arg-OH H-Pro-NH-R, 9 (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Ri -R2 -R3 -Arg-Pro-OH nh2-r, A 16, B reagens előállítása a Journ. of Med. Chem. 1144 (1973) folyóiratban leírt módon történhét. Ismert az is, hogy valamely II általános képletű védett L-glutamil-csoport R5CO-CH2CH2CH(NH2)CO- II. ahol R5 alkoxi-csoportot, például metoxi-, etoxi-, n-propoxi-, i-propoxi-, n-butoxi-csoportot, valamely aralkiloxi-csoportot, például benziloxi-csoportot vagy pedig amino-csoportot jelent, valamely bázissal, például ammóniával vagy valamely savval, például ecetsavval érintkezésbe hozva könnyen L-piroglutamil-csoporttá alakítható. így az (A) reagens L-piroglutamii-csoportja [azaz a (Pyr)Glu-csoport] egy a megfelelő helyen egy II általános 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
