173702. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-N-(alfa-hidroxi-omega-aminoalkanoil)-6'n-metil-3'-4'-didezoxi kanamicin B előállítására
19 173702 20 4 ml-es frakciókban felfogjuk és a szokásos lemezes módszerrel meghatározzuk az egyes frakciók Bacillus subtilis PCI 219 és Escherichia coli JR66/W677 kórokozók elleni baktériumellenes hatását. Azokat a frakciókat, amelyek jelentős baktériumellenes hatást mutatnak e két törzs ellen, egyesítjük egymással (körülbelül 100 ml-re) és utána szárazra pároljuk azokat. Ily módon 135 mg színtelen port kapunk, amely a kívánt termék, az 1N-(DL-izoszeril)-6’N-metil-3’,4’-didezoxikanamicin B. További tisztítás végett ezt a színtelen port (4:1 :2 tf arányú) metanol-kloroform 17%-os vizes ammóniumhidroxid-elegyben oldjuk és a keletkező oldatot 8 g szilikagél-oszlopon kromatografáljuk, eluálószerként (4:1 :2 tf arányú) metanol-kloroform 17%-os vizes ammóniumhidroxid-elegyet használunk. Az eluátumot 2 ml frakciókként fogjuk fel, amelyek közül a 20-27. számú frakciók egyedül a kíván terméket tartalmazzák. Ez a termék egyetlen foltot ad 0,51 Rf-értéknél vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat esetén szilikagélen („ART”5721), eluálószerként (4:5:2:8tf arányú) butanol-etanol-kloroform 28%-os vizes ammóniumhidroxid-elegyet használunk. Ezeket a frakciókat egymással egyesítjük és utána szárazra pároljuk. Ily módon 38 mg tiszta lN-(DL-izoszeril)-6’N-metil-3’,4’-didezoxikanamicin B vegyületet kapunk színtelen por alakjában. Bomláspont 165—169°C. 3. példa 1N -(L-izoszeril)-6’N-metil-3 ’,4 ’-didezoxikanamicin B szintézise [Olyan (I) képletű vegyület, ahol n értéke 1] a) 465 mg (3,2 millimól) t-butoxikarbonilazidot hozzáadunk 500 mg (1,1 millimól) ó’N-metil-S’^’-didezoxikanamicin B21 ml piridin, 21 ml trietilamin és 12,6 ml víz elegy ével készített oldatához. Az elegyet éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük avégett, hogy a terc-butoxikarbonilezést elősegítsük. A reakcióelegyet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk, ily módon 727 mg színtelen port kapunk, amely főként 2 *N ,6 ’N-di-terc-butoxikarbonil-6,N-metil-3 ’,4 ’-didezoxikanamicin B és ó’N-terc-butoxikarbonil-6 ’N-metil-3’,4’-didezoxikanamicin B elegye. b) 510 mg ily módon előállított színtelen port, amely főként a 6’N-metil-S’,4’-didezoxikanamicin B részben aminovédett származékait tartalmazza, tisztítás nélkül feloldunk 5 ml víz és 5 ml dímetoxietán elegyében. A keletkező oldathoz hozzáadjuk 254 mg (0,84 millimól) N-terc-butoxikarbonil-L-izoszerin-N-hidroxiszukcinimidészter 10 ml dimetoxietánnal készített oldatát. A kapott elegyet 19 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük az acilezés elősegítése céljából. Ezután a reakcióelegyet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk, így 794 mg szilárd maradékot kapunk, amely 2’N,6’N-di-terc-butoxikarbonil- és ó’N-terc-butoxikarbonil-6 ’N-metü-3 ’,4 ’-didezoxikanamicin B kevert N-acilezett származékainak az elegye. c) A szilárd maradékot 90%-os vizes trifluorecetsawal kezeljük a terc-butoxikarbonil-csoport eltávolítása érdekében, és az elegyet Amberlite CG 50 ioncserélő oszlopon kromatográfiásan tisztítjuk szilikagélen a 2/b) példában megadott módon. Ily módon 1N -(L-izoszeril)-6 TM-metil-3 ’,4’-didezoxikanamicin B tiszta vegyületet kapunk színtelen por alakjában. Bomláspont 162—166°C. 4. példa 1N -(L-5 -amino-2 -hidroxivaleril)-6 ’N -metil-3’,4’-didezoxikanamicin B szintézise [Olyan (I) képletű vegyület, ahol n értéke 3] a) 510 mg színtelen port, amely főként 2 ’N,6 ’N-di-terc-butoxikarbonii-6 ’N-metil-3 ’,4 ’-didezoxikanamicin B és 6’N-terc-butoxikarbonil-6’N-metil-3’,4’-didezoxikanamicin B elegyéből áll, és amelyet a 3/a) példában leírt módon készítettünk, tisztítás nélkül feloldunk 5 ml víz és 5 ml dímetoxietán elegyében. A keletkező oldathoz hozzáadjuk 278 mg (0,84 irallimól) L-5-butoxikarbonilamido-2- hidroxivaleriánsav-N-hidroxiszukcinimidészter 10 ml dimetoxietánnal készített oldatát. Az elegyet 18 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük az acilezés elősegítése végett. A reakcióelegyet ezután csökkentett nyomáson szárazra pároljuk és így 834 mg szilárd maradékot kapunk, amely a 2’N,6’N-di-terc-butoxikarbonil- és ó’N-terc-butoxikarbonil-6’N-metil-3’,4’-didezoxikanamicin B N-acilezett származékainak az elegye. b) A szilárd maradékot feloldjuk 8 ml 90%-os trifluorecetsavban és az oldatot 1 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk a terc-butoxikarbonil-csoport eltávolítása érdekében. Ezután a reakcióelegyet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk és a maradékot 16 ml vízben felvesszük. A keletkező vizes oldat pH-ját tömény, vizes ammóniumhidroxiddal 8,4-re állítjuk és utána az elegyet 40 ml Amberlite CG 50 gyanta-oszlopon (10, 560 mm-nél), ahol a gyanta NEL* -forma, adszorbeáltatjuk. A gyanta-oszlopot ezután egymást követően 200 ml vízzel, 250 ml 0,3 n vizes ammóniumhidroxiddal mossuk, majd a gyantát 0,75 n vizes ammóniumhidroxiddal eluáljuk. Az eluátumot 4 ml-es frakciókban felfogjuk és azokat a frakciókat, amelyek nagy baktériumellenes hatást mutatnak BaciUus subtilis PCI 219 és Escherichia coli JR66/W677 ellen, egyesítjük (körülbelül 60 ml térfogatra), utána szárazra pároljuk és szilikagél-oszlopon kromatografáljuk az 1/c) példában leírt módon. Ily módon tiszta lN-(L-5-amino-2-hidroxivaleril)-6’N-metil-3’,4’-didezoxikanamicin B vegyületet kapunk színtelen por alakjában. Kitermelés 29 mg. Bomláspont 152—155°C. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás (I) általános képletű lN-(a-hidroxi-co-aminoalkanoil)-6’N-metil- 3’,4’-didezoxikanamicin B vegyületek és gyógyszerészetileg elfogadható savad-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10
