173702. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-N-(alfa-hidroxi-omega-aminoalkanoil)-6'n-metil-3'-4'-didezoxi kanamicin B előállítására
15 173702 16 a-hidroxi-GJ-aminosawal reagáltatjuk az amidok előállításánál alkalmazott hagyományos módon. így a (IV) képletű kiindulási vegyületet az (V) képletű acilező reagenssel vízmentes dimetilformamidban, acetonban vagy tetrahidrofuránban jeges hűtés közben és valamely dehidratáló szer, így diciklohexilkarbodiimid, jelenlétében reagáltatjuk. Az (V) képletű a-hidroxi-co-aminosav acilező vegyületet természetesen funkcionálisan egyenértékű, reakcióképes származékként, így savkloridként, kevert savanhidridként, aktív észterekként vagy azid-származékként, is használhatjuk. Az (V) képletű a-hidroxi-w-aminosavat először N-hidroxiszukcinimiddel mint dehidratáló szerrel reagáltatjuk diciklohexil-karbodiimid jelenlétében, így az (V’) általános képletnek megfelelő aktív észter kapjuk, amelyet ezt követően a (IV) képletű kiindulási vegyülettel hozunk reakcióba ennek N-acilezése érdekében. A (IV) képletű kiindulási anyagot az (V’) képletű a-hidroxiaminosav 0,5—3 mólarányú, előnyösen 0,5—1,5 mólarányú, aktív észterrel reagáltatjuk víz és valamely szerves oldószer, így dimetoxietán, elegyében. A találmány szerinti eljárás acilezési lépésében szokásosan a (IV) képletű kiindulási vegyület N-acilezett származékainak az elegye keletkezik. Az elegy általában a kivánt lN-monoacilezett származékból és más nem-kívánt mono-N-acilezett származékból, valamint ugyancsak nem-kívánt poli-N-acilezett származékokból áll. Az így előállított elegyet ezután közvetlenül kezelhetjük bizonyos aminovédőcsoportoknak az eltávolítása céljából, mégpedig avégett, hogy a megmaradó amino védőcsoportokat hidrogénatomokkal helyettesítsük. Az aminovédőcsoportok eltávolítását a fent említett N-acilezett származékok keverékéből, amelyek a találmány szerinti eljárás acilezési lépésében keletkeztek, a következő két különböző, önmagában ismert módszerrel végezzük. Abban az esetben, ha az aminovédőcsoport egy alkoxikarbonil-csoport, így tere-butoxikarbo nil-cső port, cikloalkoxikarbonil-csőport, ariloxikarbonil-csoport, alkálidén- vagy arilidén-csoport, az ilyenfajta aminovédőcsoport eltávolítását úgy végezzük, hogy az N-acilezett származékok keverékét valamely savval, így vizes trifluorecetsawal, vizes ecetsavval és hígított sósavval, enyhén hidrolizáljuk. Abban az esetben, ha az aminovédőcsoport egy aralkoxikarbonil-csoport, így benziloxikarbonil-csoport, az ilyen típusú aminovédőcsoport eltávolítását úgy végezzük, hogy a kevert N-acilezett származékokat hidrogenolitikus kezelésnek vetjük alá palládium-szén- vagy platinakorom-katalizátor jelenlétében vagy ezeket alacsony hőmérsékleten hidrogénbromiddal kezeljük ecetsav jelenlétben. Az o-nitrofenoxiacetil-aminovédőcsoportot reduktív kezeléssel távolíthatjuk el. Abban az esetben, ha az aminovédőcsoport ftaloil-csoport, e ftaloil-csoport eltávolítását úgy végezhetjük, hogy kevert N-acilezett származékokat hidrazinhidráttal kezelünk etanolban. Abban az esetben, ha az N-acilezett származékok különféle aminovédőcsoportokajt tartalmaznak, az N-acilezett származékokat egyidejű vagy egymást követő kezelésnek vetjük alá a különböző aminovédőcsoportok eltávolítása érdekében. A megmaradó aminovédőcsoportok eltávolítása a ô’N-metil-à’^’-didezoxikanamicin B-ből leszármaztatott különböző módon N-acilezett termékek elegyét szolgáltatja. Az elegy a kívánt végterméket, az lN-(a-hidroxi-a>-aminoalkanoil)-6’N-metil-3’,4-didezoxikanamicin B-t, ennek helyzeti izomerjeit és a poh-N-acilezett termékeket foglalja magában bizonyos mennyiségű reagálatlan 6’N-metil-3’,4’-didezoxikanamicin B-vel együtt. A kívánt (I) képletű végtermék elkülönítését úgy végezzük, hogy az említett elegyet oszlopkromatográfiásan kezeljük például szilikagélen vagy egy karboxil-csoportokat tartalmazó kationcserélő gyantán, így Amberlite IRC 50 vagy Amberlite CG 50 gyantákon (Rohm et Haas cég terméke), egy gyenge kationcserélő gyantán, így CM-Sephadex C—25-Ön (Pharmacia Co., Svédország, terméke) vagy CM-cellulózon. A kromatográfiás folyamatból származó eluátumot frakciókra osztjuk és e frakciók baktériumellenes hatását meghatározzuk. A meghatározáshoz érzékeny és rezisztens baktériumokat használunk kísérleti mikroorganizmusokként. Az egyes frakciók baktériumellenes hatásának meghatározása útján viszonylag egyszerűen állapíthatjuk meg a kívánt (I) képletű vegyületet tartalmazó aktív frakciókat. Ezeknek az aktív frakcióknak egy részét vékonyrétegkromatográflásan megvizsgáljuk szilikagélen butanol-etanol-kloroform 17%-os vizes ammóniumhidroxid-oldószerrendszert használva. Ily módon lehetővé válik azoknak a frakcióknak a meghatározása, amelyek a kívánt (I) képletű lN-(a-hidroxi-to-aminoalkanoil)-6 ’N -met il -3 \4 ’-didezoxikana micin B fajlagos Rf értékénél egyetlen foltot adnak. Ezek kizárólag a kívánt (I) képletű vegyületet tartalmazzák. Az ilyen frakciókat azután egyesítjük és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk a kívánt (I) képletű vegyület kinyerése érdekében. A találmány szerinti (I) általános képletű új vegyületek az előzőekben megadott baktériumos fertőzések terápiás kezelésére alkalmazhatók. A találmány kiterjed állatok és az ember baktériumos fertőzéseinek a kezelésére alkalmas gyógyszerészeti készítmények előállítására is, amelynek során az (I) általános képletű IN-ía-hidroxi-co-aminoalkanoil)-6’N-metil-3’,4’-didezoxikanamicin B vegyületnek vagy gyógyszerészetiig elfogadható savaddíciós sójának gyógyászatiig hatásos mennyiségét a gyógyszerkészítésnél szokásosan alkalmazott vivőanyagokkal és/vagy adalékanyagokkal kombináljuk. A találmány szerinti eljárást a következőkben példákon is bemutatjuk, az eljárás azonban nem korlátozódik csupán a példákban leírt módszerekre. 1. példa 1N -(L4-amino-2 -hidroxíbutiril)-6 ’N-metil-3\4’-didezoxikanamicin B szintézise [Olyan (I) képletű vegyület, ahol n értéke 2] a) 930 mg (2 millimól) 6 ’N-metil-S ’,4’-didezoxikanamicin B 5 ml vízzel készített oldatához 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
