173700. lajstromszámú szabadalom • Eljárás klavulánsavészterek előállítására
15 173700 16 20. példa Kiavul ánsav-metil észt er baktérium-elleni hatása 5 A kiavulánsav-metilészter baktérium-elleni hatását mikrotiter módszerrel vizsgáljuk. Mikrotiter műanyagtálakban klavulánsav-metilészternek az Oxoid nagy-britanniai cég által gyártott tesztfolyadékkal készült hígításait beoltjuk a vizsgált 10 mikroorganizmus 1 éjszakán át végzett tenyésztése útján kapott fermentlével úgy, hogy az inokulum végső hígítása 0,5 x 10"4 legyen. A mintákat ezután 1 éjszakán át inkubáljuk, majd a következő reggel a tenyészet zavarosságának megfigyelése 15 útján a bakteriális növekedés stádiumát megállapítjuk. Ha ezt a vizsgálatot ugyanakkor a klavulánsav-nátriumsóval is elvégezzük, megállapítható, hogy a metilészter a nátriumsóhoz hasonlóan széles 20 hatásspektrumú, hatása azonban kisebb nagyságrendű. Nem állapítható meg egyértelműen, hogy a mutatott aktivitás magának a metilészternek vagy a metilészter lassú vizes hidrolízise útján felszabaduló klavulánsavnak a hatása-e. Ugyanakkor a klavulán- 25 sav-metilészter hatásos szinergista ampicilinnel vagy cefaloridinnel kombinálva ezen antibiotikumokkal szemben rezisztens törzsek esetében. így az ampicillin minimális gátlási koncentrációja (röviden MIC-értéke) Staphylococcus aureus (Russel) mikro- 30 organizmussal szemben 500 jug/ml értékről 0,4 fjg/nú értékre csökken 1,0 #ig/ml klavulánsav-metilészter jelenlétében. A cefaloridin MIC-értéke 1,5 fig/ml értékről 0,03 fig/ml érték alá csökken 1,0 fig/ml klavulánsav-metilészter jelenlétében. Az 35 ampicillin MIC-ötéke Proteus mirabilis 0889 mikroorganizmussal szemben 500 /ug/ml értékről 31 üg/ml értékre csökken 5 /ig/ml klavulánsav-metilészter jelenlétében. 21. példa Ampicillin és különböző klavulánsavészterek közötti baktériumelleni szinergizmus A 20. példában ismertetett módon Klebsiella aerogenes baktérium különböző törzseivel végzett vizsgálatokban megállapítjuk az ampicillin, illetve az alábbi kétféle szinergista kompozíció MIC-értékeit. Törzs Ampicillin önmagában Ampicillin 5 /ug/ml klavulánsav-metilészter Ampicillin 5 fig/ml klavulánsav-benzilészter A 500 1,9 1,9 E 70 500 3,9 3,9 62 500 3,9 3,9 Megjegyezzük, hogy sem a klavulánsav-metilészter, sem a klavulánsav-benzilészter nem inhibitálja a kísérleti mikroorganizmusok növekedését 100 jug/ml koncentrációban. 22. példa Klavulánsav-észterek baktériumelleni aktivitása A 20. példában ismertetett módon eljárva, de az egy éjszakán át végzett tenyésztésben kapott fermentlé 1/100-szoros hígítását használva az alábbi táblázatban felsorolt MIC-értékeket kapjuk. Klavulánsavészterek baktériumelleni aktivitása Klavulánsavészterek MIC-értéke Törzs benzilészter nonilészter pivaloil-oximetilftalidilészter észter Bacillus subtilis A 250 31 62 125 Staphylococcus aureus Oxford 62 31 31 31 Staphylococcus aureus Russel 125 31 62 15 Escherichia coli 10418 125 >500 125 125 8
