173535. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-(alfa-amino-adipoil)-amino-3-metil-3-cefém-4-karbonsav fermentációs úton történő előállítására
15 173535 16 böző vitaminok, aminosavak, nukleinsavtartalmú anyagok és hasonlók, amelyekben a DAPCP-felhalmozódás tovább növekszik. így például a metionin nagyon hatásos a Cephalosporium és Emericellopsis fajtákhoz tartozó mikroorganizmusok DACPC termelésére, míg a cisztein és/vagy cisztin a Paecilomyces, Arachnomyces, Anixiopsis és Spiroidium fajtákhoz tartozó mikroorganizmusok DACPC termelését serkentik. Az említett hatásokat a 3. és 4. Táblázatokban 5 bemutatott és az összehasonlító kísérletek kiértékelése után kapott eredmények szemléltetik. 3. Táblázat Metionin hatása DACPC felhalmozódás (pg/ml) ——_ Koncentráció % DL-metionin Törzs — 0 0/01 0,1 0,3 OS 1,0 2,0 Cephalosporium sp. ATCC 14553 20 25 35 70 105 100 30 Cephalosporium acremonium K-186 50 70 500 1500 1790 1900 500 Cephalosporium polyaleurum 7-64 70 90 250 400 560 550 150 Emericellopsis mícrospora K-163 200 240 300 450 540 550 260 4. Táblázat L-cisztein és/vagy L-dsztin hatása DACPC felhalmozódás (jug/ml) L-cisztein L-cisztin Törzs ^-^Koncentráció (%) 0 0,01 0,1 0,3 0,5 1/0 0 0,01 0,1 0,3 0,5 1/0 Paecüomyces cameus C-2237 160 190 450 520 500 250 160 180 300 400 420 225 Paecilomyces persicinus C-3009 90 120 280 310 320 150 90 105 150 220 200 120 Anixiopsis peruviana CBS-301.67 130 150 200 250 210 175 130 145 180 200 220 160 Arachnomyces minimus CBS-324.70 20 30 80 102 120 45 20 30 80 105 110 45 Spiroidium fuscum IFO-5479 50 65 90 145 130 70 50 60 85 115 100 65 A fenti kísérletek során minden egyes törzset olyan körülmények (például táptalaj, hőmérséklet, inkubációs idő) között inkubáltunk, amilyen körülményeket a később következő példáknál az egyes törzsekre megadunk. 50 Ahogy a fenti kísérleti adatokból látható, legalább 0,01%, előnyösen 0,01-2/0%, mindenekelőtt pedig 0,1—1/0% metionin hozzáadása nagymértékben segíti a Cephalosporium és Emericellopsis nemzetséghez tartozó mikroorganizmusok 55 DACPC-termelését. Legalább 0,01%, előnyösen 0,01-1 P%, különösen pedig 0,1-0,5% cisztein és/vagy cisztin adagolása különösen hatásos a nagy DACPC termelésre a Paecilomyces, Arachnomyces, Anixiopsis és Spiroidium nemzetséghez tartozó 60 mikroorganizmusoknál. Jóllehet a mikroorganizmus tenyésztése mind álló, mind pedig rázatott tenyésztési módszer szerint végezhető, általában előnyös a tenyésztés levegőigényes körülmények között süllyesztett 65 módszer szerinti végrehajtása. A tenyésztési hőmérséklet körülbelül 18 °C és 40 °C közötti hőmérséklettartományban mozog, előnyös a 22—35 °C-on való tenyésztés. Az előnyös pH-tartomány 2 pH és 10 pH között van, különösen a 4-9 pH-tartományt részesítjük ezen belül előnyben. A tenyésztést előnyösen körülbelül 72 órától 336 óráig végezzük, különösen kedvező az 50 órától a 480 óráig terjedő tenyésztési idő. Mivel a feldolgozott DACPC nagyobb része a táptalaj vizes fázisában keletkezik, előnyös, ha először a micéliumot kinyerjük a táptalajból centrifugálással vagy szűréssel és azután választjuk ki a kívánt vegyületet a felülúszóbol vagy a szűrletből. A DACPC frakcionált elkülönítése olyan analóg eljárásokkal történhet, amelyek általában használatosak gyengén savas szerves termékek vagy a cefalosporin C és más vegyületek frakcionált kinyerésénél. 8
