173457. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 18-, 19-, és 20-hidroxi-prosztaglandin-származékok mikrobiológiai előállítására
33 173457 34 adott esetben konzerváló-, felületaktív-, stabilizáló-, izotóniás és pufferanyagokkal együtt. A találmány szerint előállított szabad savakat, észtereket vagy sókat általában iv. injekcióban adjuk be kb. 0,1-10 mg dózisokban, és per os kb. 1-100 mg dózisokban. A napi iv. dózis kb. 0,4-40 mg és a per os dózis kb. 6—600 mg. A találmány szerinti eljárás kiviteli módját a példák szemléltetik. 1. példa a) Thozetellopsis tocklaiensis (OBS 378.58) ferde agartenyészetével beoltunk 100 ml 20—20 táptalajt 500 ml-es kónikus palackban. Ezt a táptalajt úgy készítjük, hogy 20 g glükózt 500 ml csapvízben feloldunk, 20 g szárított kukoricalekvárt adunk hozzá, csapvízzel 1 literre feltöltjük, és pH-értékét 30%-os nátriumhidroxid-oldattal 6,5-re beállítjuk. A sterilizálást 120C°-on 20 percig végezzük. A palackot 72 órán át 26C°-on inkubáljuk forgó rázógépen (280 ford/perc, 2,5 cm kilengés). Az így kapott tenyészetből 5 ml-t használunk 500 ml-es kónikus palackban levő 100 ml steril 10-10 táptalaj beoltására. Ezt a táptalajt ügy készítjük mint a 20-20 táptalajt, de 10 g glükózt és 10 g szárított kukoricalekvárt használunk 1 literhez. A palackot forgó rázógépen 26C°-on inkubáljuk. 18 órával a beoltás után a 3. és 8. eljárások szerint előállított 20 mg dl-9-oxo-15a-hidroxi-proszt-13(t)-énsavat 2,5 ml 50% vizes etanolban oldva adunk a táptalajhoz, és 24 órán át 26 C°-on tovább inkubáljuk. Ezután a fermentlét szűrjük, a szűrletet 10%-os vizes citromsav-oldattal 3 pH-értékre savanyítjuk, és 3 x 20 ml etilacetáttal extraháljuk. Az extraktumot vákuumban bepároljuk, és a maradékot 1% ecetsavval előkezelt szilikagéloszlopon kromatografáljuk, és 0,1% ecetsavat tartalmazó etilacetát-heptán 8 :3 keverékével eluáljuk. A megfelelő frakciókat egyesítjük, és vákuumban bepároljuk. 2,5 mg 9-oxo-l 5a,18kszi-dihidroxi-proszt-13(t)-énsavat és 3,5 mg 9-oxo-l 5a-19kszi-dihidroxi-proszt-13(t)-énsavat kapunk. A védett 18-hidroxi-teimék (szililéter, metoxim, metilészter) fizikai* jellemzői: Rf: 0,30. Ciérték: 25,9. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: me = 541, Intenzív csúcsok: 510,420, 382 , 309, 197, 131, 129, kevésbé jellemző fragmensek: 422, 390, 364, 222, 144. A védett 19-hidroxi-termék jellemzői: C-érték: 26,2. R\: 0,25. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 541. Intenzív csúcsok: 510, 420 , 382, 129, 117, kevésbé jellemző fragmensek: 466, 368, 330, 309, 222, 143. b) A fent leírt módon a 3. és 8. eljárások szerint előállított dl-9-oxo-15/3-hidroxi-proszt-13(t)-énsavat 9-oxo-l 5/3,18kszi-dihidroxi-proszt-l 3(t)-énsavvá és 9-oxo-l 5/3,19kszi-dihidroxi-proszt-13(t)énsavvá alakítjuk. A védett 18-hidroxi-termék jellemzői: C-érték: 26,0. Rj: 0,34. Kitermelés 24%. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 541. Intenzív csúcsok: 510 , 420 , 382 , 309, 197, 131, 129, kevésbé jellemző fragmensek: 422 , 390, 364, 222, 144. A védett 19-hidroxi-termék jellemzői: C-érték: 26,3. Rf: 0,28. Kitermelés 36%. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 541. Intenzív csúcsok: 510, 420, 382, 129, 117, kevésbé jellemző fragmensek: 466, 368 , 330, 309, 222, 143. c) A fenti módon eljárva, a 4. és 8. eljárások szerint előállított dl-9a,15/3-dihidroxi-proszt-13(t)-énsavat 9a,15/3,18kszi-trihidroxi-proszt-l 3(t)-énsawá és 9a,15/3,19kszi-trihidroxi-proszt-13(t)-énsawá alakítjuk. A 18-hidroxi-vegyület szililezett metilészterének jellemzői: C-érték: 24,3. Rf: 0,32. Kitermelés 19%. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 586. Intenzív csúcsok: 427, 337, 297, 197, 131, 129, kevésbé jellemző fragmensek: 557, 496, 467, 377, 350 , 310 , 247, 144. A 19-hidroxi-vegyület szililezett metilészterének jellemzői: C-érték: 24,6. Rj: 0,27. Kitermelés 38%. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 586. Intenzív csúcsok: 427, 337, 297, 197, 143, 129, 117, kevésbé jellemző fragmensek: 496, 452 , 310, 247, 143. d) A fenti módon eljárva, a 4. és 8. eljárások szerint előállított dl-9/3,15/3-dihidroxi-proszt-l 3(t)-énsavat 9/3,15/3,18-vSzi-trihidroxi-proszt-l 3(t)-énsawá és 9/3,15/3,19kszi-trihidroxi-proszt-l 3(t)-énsawá alakítjuk. A 18-hidroxi-termék szililezett metilészterének jellemzői: C-érték: 24,3. Rf: 0,28. Kitermelés 30%. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 586. Intenzív csúcsok: 427, 337, 247, 197, 131, 129, kevésbé jellemző fragmensek: 557, 467, 377, 350, 297, 223. A 19-hirdoxi-termék szililezett metilészterének jellemzői: C-érték: 24,6. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 586. Intenzív csúcsok: 427, 337, 247, 197, 129, 117, kevésbé jellemző fragmensek: 452, 297, 223. e) A fenti módon eljárva 9-oxo-15a-hidroxi-proszta-5(c),8(12),13(t)-triénsavat (PGBj) 9-oxo-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 17
