173457. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 18-, 19-, és 20-hidroxi-prosztaglandin-származékok mikrobiológiai előállítására
35 173457 36-1 5a,18kszi-dihidroxi-proszt-5(c),8(12),l 3(t)-triénsawá és 9-oxo-15a,19kszi-dihidroxi-proszta-5(c),8(12),13(t)-énsawá alakítunk. A védett 18-hidroxi-vegyület (szililéter, metilészter, metoxim) jellemzői: C-érték: 27,2. R}: 0,24. Kitermelés 17%. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 537. Intenzív csúcsok: 506, 416, 360, 131, kevésbé jellemző fragmensek: 418, 378, 326, 162. A védett 19-hidroxi-vegyület jellemzői: C-érték: 27,7. R‘f: 0,20. Kitermelés 20%. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 537. Intenzív csúcsok: 506, 416, 129, 117, kevésbé jellemző fragmensek: 378, 346, 326, 162. f) A fenti módon eljárva 9-oxo-15a-hidroxi-proszta-5(c),10,l 3(t)-triénsavat (PGA2 ) 9-oxo-15a,- 18kszi-dihidroxi-proszta-15(c), 13(t)-diénsawá és 9 -o xo -15a ,19kszi-dihidroxi-proszta-5(c),l 3(t)-diénsawá alakítunk. A védett 18-hidroxi-vegyület jellemzői: C-érték: 25,9. Rf: 0,32. Kitermelés 26%. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 539. Intenzív csúcsok: 508, 418, 131, 129, kevésbé jellemző fragmensek: 438, 380, 226, 220, 197. A védett 19-hidroxi-származék jellemzői: C-érték: 26,2. Rf: 0,25. Kitermelés 18%. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 539. Intenzív csúcsok: 508, 418, 380, 348, 143, 129, 117, kevésbé jellemző fragmensek: 438, 226, 220. g) A fenti módon eljárva, a 4. és 8. eljárások szerint előállított dl-9ß,l 5a-dihidroxi-proszt-l 3(t)-énsavat 9/3,15a,18kszi-trihidroxi-proszt-l 3(t)-énsawá és 90,15a,19kszi-trihidroxi-l 3(t)-énsawá alakítjuk. A 18-hidroxi-vegyület szililezett metilészterének jellemzői: C-érték: 24,3. Rf: 0,25. Kitermelés 20%. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 586. Intenzív csúcsok: 427 , 337 , 247, 197, 131, 129, kevésbé jellemző fragmensek: 557, 467, 377, 350, 297, 223. A 19-hidroxi-vegyület szililezett metilészterének jellemzői: C-érték: 24,6, Rf: 0,21. Kitermelés 15%. Molekulacsúcs a tömeg spektrumban: m/e = 586. Intenzív csúcsok: 427 , 337 , 247, 197, 129, 117, kevésbé jellemző fragmensek: 452, 297, 223. h) A fenti módon eljárva, a 4. és 8. eljárások szerint előállított dl-9a,15-dihidroxi-proszt-13(t)-énsavat 9a,15a,18kszi-trihidroxi-proszt-l 3(t)-énsawá és 9a,15a,19kszi-trihidroxi-proszt-13(t)-énsawá alakítunk. A 18-hidroxi-termék szililezett metilészterének jellemzői: C-érték: 24,2. Rf: 0,28. Kitermelés 18%. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 586. Intenzív csúcsok: 427, 337, 297, 197, 131, 129, kevésbé jellemző fragmensek: 557, 496, 467, 377, 350, 310 , 247, 144. A 19-hidroxi-vegyület szililezett metilészterének jellemzői: C-érték: 24,5. Rf: 0,23. Kitermelés 35%. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 586. Intenzív csúcsok: 427, 337, 297, 197, 143, 129, 117, kevésbé jellemző fragmensek: 496, 452, 310, 247, 143. 2. példa a) Delacroixia coronata (CBS 647.68) ferde ager-tenyészetével beoltunk 100 ml steril 20—20 táptalajt 500 ml-es kónikus palackban. Ezt a táptalajt az la) példában leírt módon készítjük el. A palackot 26 C8-on 72 órán át forgó rázógépen (280 ford/perc, 2,5 cm kilengés) inkubáljuk. Az így kapott tenyészet 5 ml-ével beoltunk 100 ml steril 10-10 táptalajt 500 ml-es kónikus palackban. A táptalajt az la) példa szerint állítjuk elő. A palackot 26C*-on forgó rázógépen inkubáljuk. A beoltás után 18 órával a 6. és 8. eljárások szerint előállított, 2,5 ml 50%os etanolban oldott 20 mg dl-9a,l 5a-dihidroxi-l50-metil-proszt-l3(t)-énsavat adunk a táptalajhoz, és az inkubálást 26 C*-on még 24 órán át folytatjuk. Ezután a fermentlét szűrjük, a szűrlet pH-értékét 10%-os citromsav-oldattal 3-ra savanyítjuk, és 3 x,20 ml etilacetáttal extraháljuk. Az extraktumot vákuum ban bepároljuk, és a maradékot 1% ecetsavval előkezelt szilikagél-oszlopon kromatografáljuk, az eluálást 0,1% ecetsavat tartalmazó etilacetát-heptanol 8 :3 keverékével végezve. A megfelelő frakciókat egyesítjük, és vákuumban bepároljuk. 2,0 mg 9a,15a,18kszi-trihjdroxi-l 5ß-metil-proszt-13(t)-énsavat és 3,8 mg 9a,15a,19kszi-trihidroxi-15/3-metil-proszt -13(t)-énsavat kapunk. A 18-hidroxi-termék szililezett metilészterének jellemzői: C-érték: 24,2. Rf: 0,33. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 600. Intenzív csúcsok: 441, 351, 297, 211, 143, 131, kevésbé jellemző fragmensek: 585 , 571, 481, 323, 301, 257, 144. A védett 19-hidroxi-termék jellemzői: C-érték: 24,6. Rf: 0,29. Molekulacsúcs a tömegspektrumban: m/e = 600. Intenzív csúcsok: 441, 351, 297, 143, 117, kevésbé jellemző fragmensek: 585, 323, 301, 211. b) A fenti módon eljárva, a 7. és 8. eljárások szerint előállított dl-9-oxo-l 50-hidroxi-l 5a-metil-20- -etil-proszt-13(t)-énsavat 9-oxo-150,18kszi-dihidroxi-15a-metil-20-etil-proszt-l 3(t)-énsawá és 9oxo-15ß-19kszi-dihidroxi-15a-metil-20-etil-proszt-13(t)-énsawá alakítunk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 18
