173445. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antibiotikum elegy előállítására
17 173445 18 tartalmaztak. A 482-900. frakciók A—30912 antibiotikum A, E, F és G faktort tartalmaztak. A 438-481. frakciókat egyesítettük és vákuumban betöményítettük, így olajszerű anyagot kaptunk. Ezt az olaj szerű anyagot kis mennyiségű metanolban feloldottuk, és a metanolos oldatot 15 térfogatrész dietiléterhez adtuk. A képződött csapadékot elválasztottuk és megszárítottuk, így 2,17 g A-30912 antibiotikum A faktort kaptunk. 4. példa Az A—30912 antibiotikum D faktor elkülönítése A 3. példa szerinti módon eljárva a 274—437. frakciókból részben tisztított, A—30912 antibiotikum B, C és D faktort tartalmazó antibiotikum elegyet kaptunk. Ezt az anyagot (750 mg) szilikagél oszlopon (2,2 x 51 cm, Woelm) kromatografáltuk, körülbelül 15 ml térfogatú frakciókat gyűjtöttünk össze és az eluálást az alábbi oldószerekkel végeztük: Frakciók Oldószer 1-25. acetonitril 26-62. acetonitril + 1% víz 63-700. acetonitril + 1,5% víz Az oszlopról lejövő frakciókat szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfíával ellenőriztük, acetonitril-víz (95 :5) és benzol-metanol (7 :3) oldószerrendszert és jelző organizmusként Candida albicans-t használtunk. Az A—30912 antibiotikum D faktort tartalmazó 535—685. frakciókat egyesítettük, és vákuumban olajszerű anyaggá betöményítettük. Ezt az olajszerű anyagot kis mennyiségű metanolban feloldottuk, és 15 térfogatrész dietiléterhez adtuk. A képződött csapadékot szűréssel elválasztottuk és meg szárítottuk. így 69 mg A—30912 antibiotikum D faktort kaptunk. 5. példa Az A—30912 antibiotikum B és C faktor elkülönítése A 3. példa szerinti módon eljárva a 212-437. frakciókból részben tisztított, A—30912 antibiotikum A, B, C és D faktort tartalmazó antibiotikum komplexet kaptuk. Ezt az anyagot (18 g) minimális mennyiségű acetonitril-víz (4:1) elegyben feloldottuk, és alumíniumoxid oszlopon (3,8x56 cm, Woelm) kromatografáltuk, körülbelül 20 ml térfogatú frakciókat gyűjtöttünk össze. Az oszbpot az alábbi oldószerekkel eluáhuk: Frakciók Oldószer 1—300. acetonitril-víz (4 :1) 301—509. acetonitril-víz (7 : 3) Az oszlopról lejövő frakciókat szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfíával ellenőriztük a 4. példában leírt módon. Ezeknek az eredményeknek az alapján frakciókat egyesítettünk és olajszerű anyagokká töményítettük be őket. Az olaj szerű maradékokat kis mennyiségű metanolban feloldottuk, a metanolos oldatokat 10-15 térfogatrész dietiléterrel kicsapjuk. A frakciók egyesítésének módját, a kapott anyag súlyát és az egyesített frakciókban levő faktorokat az alábbiakban foglaljuk össze. Frakciók Súly (g) Faktor 6-28. 0,23x-6-28. 5,80 A—30912 C, D 34-114. 2,90 A-30912 B 115-164. 1,20 A—30912 A, B 165-509. 1,90 A—30912 A x az éteres lecsapás előtt kapott oldhatatlan anyag. Tisztított A—30912 C faktor előállítása céljából a 6—28. frakciók egy részletét (2 g) metanolban feloldottuk, elegendő mennyiségű szilikagélen (62. fokozat) adszorbeáltuk, megszárítottuk, és acetonitrilben szilikagél oszlopra (1,9x80 cm, 62. fokozat) vittük fel. Az oszlopot acetonitrillel eluáltuk 2 ml/perc átfolyási sebességgel, körülbelül 10 ml térfogatú frakciókat gyűjtöttünk össze. A 117. frakciónál az oldószert acetonitril-víz (99:1) elegyre cseréltük. Az oszlopról lejövő frakciókat itt is vékonyrétegkromatográfiásan ellenőriztük. A vékonyrétegkromatográfia eredményei alapján frakciókat gyűjtöttünk össze, és olajszerű maradékokká töményítettük be őket. Az olajszerű maradékokat kis térfogatú metanolban feloldottuk, és a metanolos oldatokat 10-15 térfogatrész dietiléterrel csaptuk le. A frakciókban levő faktor -mennyiséget és az érdeklődésre számot tartó frakciók súlyát az alábbiakban foglaljuk össze. Frakciók Súly (g) Faktor 341-479. 0,250 D 480-540. 0,015 D 541-899. 0,391 C, D 900-1675. 0,340 C Szabadalmi igénypontok: 1. Egárás az A, B, C, D, E, F és G faktorokból álló, A—30912 jelzésű antibiotikum elegy és a faktorok előállítására, azzal jellemezve, hogy 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
