173421. lajstromszámú szabadalom • Eljárás enzimatikus úton lipofilizált triglicerid-zsírt tartalmazó táplálék komponens előállítására
7 173421 8 ismert aktivitású mintákat ügy hígítjuk, hogy az oldatok milliliterenként 1-3,6 lipáz-egységet tartalmaznak. A lipáz-egység meghatározását később adjuk meg. Az eljárás Az emulziót és a puffert 3 :1 súlyarányban keverjük, amikor megkapjuk a szubsztrátoldatot. 8,0 ml szubsztrátot 100 ml, mágneses keverővei felszerelt edénybe pipettázunk, majd keverjük. Mindegyik mintát (a vak- és a tényleges minta) párhuzamos mérések során vizsgáljuk. A következőképpen járunk el: Vakpróba: a szubsztráthoz 1. 40 ml etilalkoholt és 2. 2,0 ml enzimoldatot adunk. A tényleges minta: 1. A szubsztrátoldatot 30 C* hőmérsékletű vízfürdőben melegítjük. 2. 2 ml enzimoldatot adunk hozzá. 3. 5,0 percen át 30 C° hőmérsékleten inkubáljuk a reakcióelegyet. 4. 40 ml etilalkoholt adunk hozzá. Mind a vakpróbát, mind a mintát pH 8,0-ig 0,02 n nátriumhidroxid oldattal titráljuk. Számítás 1 lipáz-egység (LE) az a lipázmennyiség, amely 1 mM H* felszabadításához szükséges, percenként. A lipáz-aktivitás (LA) meghatározása: a készítmény grammonkénti LE-tartalma. ml NaOH x nHaOH x 103 LA ------------------------------------------------------mg adagolt enzimkészítmény x 103 x perc Ha 0,02 n nátriumhidroxidot használunk, és a reakcióidő 5 perc, ügy ml NaOH x 4000 LA = -------------------------mg enzim U.S.P. = United States Pharmacopoeia N.F. = National Formulary CP. = kémiailag tiszta. A kívánt lipolitikus enzim-tartalmú, ízesítőszer előállítására alkalmas készítményt a hagyományos fermentációs eljárást követő elkülönítéssel nyerjük. Felhasználható szén- és nitrogénforrást, továbbá nyomelemeket tartalmazó táptalajt valamely Mucor miehei törzzsel oltjuk be, majd süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények között, 3-8 közötti pH-értéken, 20 C° és 50 C* közötti hőmérsékleten, 2 és 14 nap közötti időn át tenyésztünk. Ily módon tenyészthető, alkalmas és a kívánt enzimrendszert termelő Mucor miehei törzsek korlátozás nélkül hozzáférhetők például a következő számon: NRRL A 13131 és A 13042 (Northern Regional Research Laboratories, Peoris, Illinois). Más Mucor Miehei törzsek ugyancsak használhatók, és a fentiekben már említett, 1-nél nagyobb észter áz-lipázaktivitás-hányadossal rendelkeznek. Az eddig ismert gyakorlat szerint az észt eráz és lipáz enzimeket melléktermékként általában vagy eltávolították, vagy inaktiválták a tejoltó készítmények előállításakor, mint ahogy azt a 3 616 233 és 3 763 011 számú amerikai, 2 232 996 számú német és 1 207 892 számú brit szabadalmi leírásokban megadják. A találmány során használt enzimkészítményt a tenyészléből izoláljuk, a későbbiekben megadott AE/LA arányú terméket kapva. Az izolálást végezhetjük a tenyészlé 4 és 5 közötti pH-n való szűrésével, a szűrési maradék 10 és 12 közötti pH-n való extrakciójával, az extraktum 7 pH-ra való savanyításával, majd a savas extraktum szűrésével, vagy bepárlásával vagy ultraszűrésével, illetve a sűrítmény szárításával, például porlasztva szárításával. Belátható, hogy bizonyos célokra olyan lipolitikus enzimkészítményt kell használnunk, amely gyakorlatilag mentes a tejoltó-enzimtől. Ezt a szakemberek előtt ismert elkülönítési eljárások alkalmazásával vagy más tisztítási eljárásokkal végezzük. Az elkülönített lipolitikus enzimkészítményt tejhez, tejzsírhoz, vajolajhoz, sajthoz, tejcsokoládéhoz, margarin-olajhoz, kávéfehérítőhöz és más, triglicerideket tartalmazó táplálékhoz és táplálék-komponensekhez adhatjuk, majd 10 C° és 50 C° közötti hőmérsékleten 2 óra és 20 nap közötti időn át inkubáljuk a készítményt, ami után a kívánt tej- és vajízű táplálékot kapjuk. Használhatjuk a készítményt ezen táplálékok és táplálék-komponensek természetes ízei létrejöttének gyorsítására vagy erősítésére, és összekeverhetjük ismert ízesítőszerekkel különböző ízárnyalatok létrehozásához. így például keverhetjük a találmány szerinti eljárással előállított készítményt a 2 531 329 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás szerint készült, a Dairyland Food Laboratory által Italase néven forgalmazott pregasztrikus eszterázzal, vagy használhatjuk a 3100153 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás szerint Pénicillium roquefortival készült ízesítőszerrel együtt is. Általában úgy járunk el, hogy az elkülönített lipolitikus enzimet 0,001% és 0,1% közötti mennyiségben hozzáadjuk a triglicerides zsírt tartalmazó szubsztráthoz, a tej 453,6 kilogrammjához előnyösen 3,54 g és 56,7 g közötti mennyiségű enzimet adunk. A találmány szerinti eljárás során előállított lipolitikus, enzimkészítménnyel az előnyös ízű táplálékok készítésére például a következő triglicerid-típusú zsírokat kezeljük: állati zsírok, mint például a tejzsír, disznózsír és birkazsir, és a növényi zsírok, mint a gyapot magolaj, szójaolaj, kukoricaolaj, földimogyoróolaj, sáfrányolaj, pálma; olaj, kókuszdióolaj, margarin és növényi olajelegyek. s 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
