173101. lajstromszámú szabadalom • Eljárás enzimtartalmú mikroorganizmus sejtek rögzítésére
9 173101 10 Szűréssel elkülönítjük a szilárd halmazállapotú terméket és vízzel mossuk, amikor 43,6 g, a nem kezelt, eredeti sejtek glükóz-oxidáz aktivitásának 75 %-át tartalmazó nedves, rögzített sejtekből álló készítményt kapunk. 9. példa A 8. példában megadott eljárással előállított nedves, rögzített sejteket tartalmazó készítmény 28,3 m g-ját 200 ml, 20 g glükózt tartalmazó vízhez adjuk, majd levegőztetés közben 21 órán át szobahőmérsékleten keverjük a szuszpenziót. A glükóz 80 %-ban glukonsawá és delta-glukonolaktonná alakul. Szüljük a szuszpenziót, a szűrési maradékot vízzel 15 mossuk, amikor 28 g, az eredeti - enzimaktivitás 82%-át tartalmazó, nedves, rögzített sejteket tartalmazó készítményt kapunk. 10. példa 20 65 ml vízben 5 g, a 4. példában megadott eljárással tenyésztett és elkülönített nedves Proteus rettgeri sejtpasztát és 10 g, az 1. példa szerinti eljárással előálított glicidil-metakrilát polimerizátumot szusz- 25 pendálunk, majd 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük a szuszpenziót. Ezután szűrjük, és a szűrési maradékot vízzel mossuk, amikor 26,9 g, az eredeti penidllin-aciláz aktivitás 62 %-át tartalmazó rögzített sejtkészítményt kapunk. ■ jq 25 g (1 g szárazsúly) rögzített sejtet 50 ml, 04, g 25 súlyszázalékos vizes glutáraldehidet vagy megfelelő mennyiségű piroszőlősav- aldehidet tartalmazó vízhez adunk. 7,0-re állítjuk be a szuszpenzió pH-ját, majd 3 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután szűrjük, a szűrési maradékot vízzel mossuk, amikor 23,2 g nedves, a nem kezelt, rögzített sejtek penicillin-aciláz aktivitásának 79 %-át tartalmazó kezelt rögzített sejtkészítményt kapunk. 11. példa ^ 100 ml 8,0 pH-jú, 37 C° hőmérsékletű vízben 12 g, a 10. példában megadott eljárással előállított nedves, kezelt, rögzített készítményt szuszpendálunk, 45 majd 1 g kálium-penicillin G-t adunk a szuszpenzióhoz. 1 n nátrium- hidroxid oldat ellenőrzött adagolásával 8,0-on tartjuk a szuszpenzió pH-ját, amikor 3 óra alatt a hidrolízis teljessé válik. Szűréssel elkülönítjük a rögzített sejteket, vízzel mossuk, és nedves 5q pasztaként további felhasználásig tároljuk őket. 2 n hidrogénkloriddal 2-re állítjuk be a szűrlet pH-ját, és etilacetáttal extrahájuk. 2 n nátriumhidroxid oldattal 4,3-ra állítjuk be a vizes fázis pH-ját, töményítjük, és hűtjük, amikor kristályos 6-aminope- 55 nicillánsavat kapunk. 12. példa 100 ml vízben 20 g (4 g szárazsúly) az 1. példában 60 megadott eljárással tenyésztett és elkülönített Aspergillus niger sejtet és 8 g glicidil-metakrilátot szuszpendálunk, majd 7,5-re állítjuk be a szuszpenzió pH-ját és szobahőmérsékleten 18 órán át rázzuk. Ezután 1,5 g NjN’-metilén-bisz-akrilamidot adunk a szuszpenzióhoz 65 majd nitrogénatmoszféra alatt 15 percen át keverjük, 5 C° hőmérsékletre hűtjük, 150 mg ammóniumperszulfátot és 1 ml dimetilamino-propionilt adunk hozzá, végül 3 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Szűréssel elkülöníljük a szilárd halmazállapotú terméket és vízzel mossuk, amikor 71 g, az eredeti glükóz-oxidáz aktivitás 62 %-át tartalmazó nedves, rögzített sejtkészítményt kapunk. 100 ml, 0,4 g 25 súly százalékos vizes glutáraldehidet tartalmazó vízben 18 g (szárazsúly = 1 g) rögzített sejtkészítményt szuszpendálunk. 7,0-re állítjuk be a szuszpenzió pH-ját, és 3 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Szűréssel elkülönítjük a szilárd halmazállapotú terméket, és vízzel mossuk, amikor 17,3 g, a glutáraldehides kezelés előtti rögzített sejtekben lévő glükóz-oxidáz aktivitás 75 %-át tartalmazó nedves, rögzített sejtkészítményt kapunk. 13. példa 15 ml, 1,5 g glükózt tartalmazó vízben 14 g nedves a 12. példában megadott eljárással előállított kezelt, rögzített sejtkészítményt szuszpendálunk, majd 21 órán át, levegőztetés közben, szobahőmérsékleten keverjük a szuszpenziót. A glukonsawá alakulás és az enzimaktivitás visszanyerésének mértéke a 3. példában megadottal azonos. 14. példa Süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények között, 28 C nőmérsékleten, 6,8-7,0 közötti pH-jú, glükózt tartalmazó táptalajon Rhodotorula gracilis (NRRL Y1091; Pfizer Culture FD 6521) mikroorganizmust tenyésztünk, majd centrifugálással elkülönítjük a sejteket. 250 ml vízben 50 g mosott sejtet szuszpendálunk, majd 5 g az 1. példa szerinti módon előállított glicidil-metakrilátot polimerrel kezeljük a sejteket. 20 órán át szobahőmérsékleten keverjük a szuszpenziót. Ezután szűrjük, a szűrési maradékot vízzel mossuk, amikor 63, g az eredeti fenil-alanin-ammónia-liáz aktivitás 49 %-át tartalmazó nedves, rögzített sejtkészítményt kapunk. 15. példa 30 ml, 2,25 g transz-cinnaminsavat, 652 mg ammóniumkloridot és 3,3 ml tömény ammóniumhidroxidot tartalmazó vízben 14,74 g, a 14. pddában megadott eljárással előállított nedves, rögzített sejtkészítményt szuszpendálunk, majd 9,5-re álltjuk be a szuszpenzió pH-ját. 18 órán át 37 C° hőmérsékleten rázzuk a szuszpenziót, amikora visszanyert cinnaminsavból számítva 90 %-os kitermeléssel L-fenüalanint kapunk. Szűréssel elkülönítjük a szilárd halmazállapotú anyagokat, és vízzel mossuk, amikor 14 g, az eredeti fenilalanin- ammónia-liáz aktivitás 77 %-át tartalmazó nedves, rögzített sejtkészítményt kapunk. Az L-fenilalanint ismert eljárásokkal különítjük el a szürletből. 16. példa 80 ml vízben 40 g, a 14. példában megadott eljárással tenyésztett és elkülönített mosott Rhodotorula gracilis sejtpasztát és 8 g glicidil-metakrilátot szuszpendálunk, majd 7,2-re állítjuk be a szuszpenzió 5
