173101. lajstromszámú szabadalom • Eljárás enzimtartalmú mikroorganizmus sejtek rögzítésére
11 173101 12 pH-ját és szobahőmérsékleten 1,5 órán át keverjük. Ezután 1,5 g N ,N ’-metilén -bisz-akrilamidot adunk hozzá, majd nitrogénatmoszféra alatt 10 percen át keverjük a kapott reakcióelegyet, amiután 5 C° hőmérsékletre hűtjük, 150 mg ammóniumperszulfátot és 1 ml dimetilamino-propionitrilt adunk hozzá, és három órán át szobahőmérsékleten keverjük. Az ezután kapott szuszpenziót vízzel hígítjuk, és szűrjük. A szűrési maradékként kapott polimer terméket vízzel mossuk, amikor 62,3 g az eredeti fenialaninammónia- lizá aktivitás 44 %-át tartalmazó nedves, rögzített sejtekből álló készítményt kapunk. 17. példa 30 ml, 1,12 g transz-cinnaminsavat, 320 mg ammóniumldoridot és 1,6 ml tömény ammóniumhidroxidot tartalmazó vízben 15 g, a 16. példában megadott eljárással előállított rögzített készítményt szuszpendálunk, majd 9,5-re álltjuk be a szuszpenzió pH-ját. 18 órán át 37 C° hőmérsékleten rázaljuk a reakcióelegyet, amikor a 15. példában megadott kitermeléssel L- fenilalanint kapunk. 18. példa 100 ml vízben 15 g, a 4. példában megadott eljárással tenyésztett és elkülönített nedves Proteus rettgeri sejtpasztát és 30 g, az 1. példában megadott eljárással előállított gjicidil-metakrilát polimert szuszpendálunk, majd szobahőmérsékleten, 7 pH-n, 18 órán át keverjük a szuszpenziót. Ezután centrifugájuk, az üledéket vízzel mossuk, amiután 100 g, az eredeti penicillin-aciláz aktivitás 100 %-át tartalmazó nedves, rögzített sejtkészítményt kapunk. 70 ml 8,0 pH-jú, 37 C° hőmérsékletű vízben 25 g nedves, rögzített sejteket tartalmazó készítményt szuszpendálunk, majd 1 g kái um-penicillin G-t adunk a szuszpenzióhoz. A hidrolízis 3 órán belül teljes; a reakció közben 1 n nátriumhidroxid oldat ellenőrzött adagolásával 8,0 értéken tartjuk a reakcióelegy pH-ját. Ezután szűrjük a szuszpenziót, a rögzített sejteket tartalmazó szűrési maradékot vízzel mossuk és újrafelhasznáásig nedves pasztaként tároljuk. Ezen sejtek hatásossága a 6-aminopenicillánsav előállításakor nem olyan nagymértékű, mint a 4. pádában megadott eljárással előállított rögzített sejteké, mivel mindössze két hidrolízis után az eredeti sejtek peniciilin-aciláz aktivitásának csak 15 %-a marad meg. 19. példa 100 ml vízhez 25 g 2-hidroxietil-metakrilátot adunk, majd 12,5 g, 100 ml vízben oldott cianogénbromiddal egészítjük ki a reakcióelegyet. 5 n nátriumhidroxid oldattal azonnal 11-re állítjuk be az elegy pH-ját, amikor hőmérséklete 46 C -ra emelkedik, majd ezen a pH-n tartjuk, míg további bázist nem kell adagolnunk. Ezután szobahőmérsékletre hűtjük az degyet, pHját 6,5-re álítjuk be, és 50 g, szárítás előtt a 4. példában megadott djárással tenyésztett és dkülönített, fagyasztva szárított és 500 ml vízben szuszpendált Proteus rettgeri sejtet adunk hozzá. 45 percen át keverjük a szuszpenziót. Ezután 25 g akrilamidot és 2,5 g N,N’-metilén-bisz-akrilamidot adunk hozzá, 15 percen át keverjük, 4 C° hőmérsékletre hűtjük, és 4 ml dimetilamino-propionitrilt és 425 mg ammóniumperszulfátot adunk hozzá. Szobahőmérsékletre hagyjuk melegedni a polimerizációs reakcióelegyet, és 1 órán át hagyjuk állni. Ezután Waring-keverőben összekeverjük, és centrifugáljuk. A gélszerű üledéket vízben szuszpendáljuk, centrifugálással elkülönítjük, vízzel mossuk és fagyasztva szárítjuk, amikor 112 g, az eredeti peniciilin-aciláz aktivitás 19 %-át tartalmazó száraz, rögzített sejtkészítményt kapunk. 20. példa 80 ml vízben 20 g, a 4. példában megadott djárással tenyésztett és elkülönített nedves Proteus rettgeri sejtpasztát szuszpendálunk, és 1 g 25 súlyszázalékos vizes glutáraidehidet és 10 g glicidil-metakrilátot adunk a szuszpenzióhoz. 6,8-ra állítjuk be a szuszpenzió pH-ját és 2 órán át szobahőmérsádeten keverjük. Ezután nitrogénatmoszféra alatt 1,9 g N,N’-metilén-bisz-akrilamidot és 2 ml dimetil-amino-propionitrilt adunk a reakcióelegy hez, pH-ját 7-re állítjuk be és 200 mg ammóniumperszulfátot adunk hozzá. 0,5 órán át keverjük az így kapott szuszpenziót, majd 1,5 órán át szobahőmérsékleten hagyjuk dini. Szűrjük a szuszpenziót, a szűrési maradékot vízzel mossuk, amikor 81,3 g nedves, az eredeti, nem kezelt sejtek peniciilin-aciláz összaktivitásának 54 %-át tartalmazó, rögzített sejtekből álló készítményt kapunk. Az dőállított nedves, rögzített sejteket a 7. példában megadott módon és eredménnyel a káliumpenicillin G 6-aminopenicillánsawá alakítására használjuk. 21. példa 28 C° hőmérsékleten, 6-8 közötti pH-jú, proteinhidrolizátumot tartalmazó táptalajon, süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények között Bacterium cadaveris (ATCC 9760; Pfizer Culture FD 24016) mikroorganizmust tenyésztünk. Centrifugáljuk a tenyészetet, a sejteket vízben szuszpendáljuk, és félszáraz pasztát készítünk belőlük. 100 ml vízben szuszpendáljuk a sejteket (7,5 g szárazsúly) és 4 g 25 súlyszázalékos vizes glutáraídehidet adunk a szuszpenzióhoz. 2 órán át 7 pH-n keverjük a szuszpenziót, majd centrifugáljuk. 100 ml vízben szuszpendáljuk a kezelt sejteket, és keverés közben 6,5 g, az 1 példában megadott eljárással előállított glicidil-metakrilát polimert adunk a szuszpenzióhoz. Szobahőmérsékleten, pH 7,0-án 30 órán át keverjük a szuszpenziót. Szűréssel elkülönítjük a szilárd halmazállapotú terméket, vízzel mossuk és felhasználásig nedves pasztaként tároljuk. 22. példa 140 ml tömény ammóniumhidroxidhoz 120 g fumársavat adunk. Ammóniumhidroxiddal 8,5-re állítjuk be az elegy pH-ját, és vízzel 600 ml-re hígítjuk. Ezután a 21. példában megadott eljárással előállított, 7000 p aszpartát ammónia-liáz aktivitású, rögzített sejteket tartalmazó készítményt adunk a reakcióelegy -5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
