172960. lajstromszámú szabadalom • Eljárás Streptomyces fradiae törzsek pronáz termelésének fokozására és pronáz fermentációjára
5 172960 6 0,001% FeS04 • 7H20 0,001% MnCl2 • 4H2 0 0,5% pálmaolaj A pH érték sterilizés előtt 7,5, sterilizés után 6,9-7,0. Az enzimaktivitást pronáz egységben adtuk meg [Acta microbiol. Acad. Sei. hung. 19, 1972) 77]. Eredményeinket az 1. sz. táblázatban foglaltuk össze. A táblázat adatai mutatiák, hogy egyedül az ismert mutagén kezeléssel nem lehetett izolálni a szülőtörzshöz viszonyítva magasabban termelő variánsokat, legfeljebb a termelési szórás mértéke csökkenthető ezzel a módszerrel. 2. példa P-102003 jelű Streptomyces fradiae törzs (OKI 00 144 1975. XI.) Czapek—Dox agaron nőtt spóratenyészetéről spóraszuszpenziót készítettünk az 1. példa szerint. A spóraszám 6,6 10®/ ml volt. A spóraszuszpenzióból fiziológiás konyhasóoldattal hígítást készítettünk, a hígított spóraszuszpenzió spóraszáma 6,6 103/ml volt. A hígított spóraszuszpenziót fél milliliterenként steril Petri-csészékbe osztottuk szét, majd Perri-csészénként 20-20 ml olyan 6,8, illetőleg 7,5 pH-értékű Czapek-Dox táptalajt kevertünk hozzá, amelyeknek neomicin-gentamicin- illetve streptomicin koncentrációja 0,124-180 E/ml, táptalaj értékek között változott. 5 (lásd a 2. sz. táblázatot) A lemezeket 7 napon át 28 C°-on termosztáltuk. A csíraszámolást a 7. napon végeztük el. Mivel minden antibiotikum koncentrációhoz 4 lemezt állítottunk be, csíraszámnak a lemezeken kapott eredmények középértékét adtuk meg. Eredményeinket a 2. sz. táblázatban adjuk meg. A táblázat adatai alapján megállapítható, hogy neomicinnel kiegészített 7,5 pH-jú táptalajon 20—100 E/táptalaj ml koncentrációnál, 6,8 pH-jú 15 táptalajon 80—160 E/táptalaj ml koncentrációnál, gentamicinnel kiegészített 7,5 pH-jú táptalajon 2,0—10,0 E/táptalaj ml koncentrációnál, 6,8 pH-jú táptalajon 8,0—12,0 E/táptalaj ml koncentrációnál, streptomicinnel kiegészített 7,5 pH-jú táptalajon 20 1,0—8,0 E/táptalaj ml koncentrációnál, 6,8 pH-jú táptalajon 8-14 E/táptalaj ml koncentrációnál kaptunk 99%-os, illetve ennél nagyobb pusztulást. 3. példa 25 A 2. példában megadott metodikával az alábbi Czapek-Dox agar táptalajokon végeztünk szélesztéseket, illetőleg izoláltunk telepeket: Táptalaj pH 6,8 Táptalaj pH 7,5 Izolált telepek Antibiotikum antibiotikum cc. antibiotikum cc. száma E/táptalaj ml E/táptalaj ml pH 6,8 pH 7,5 Neomicin 160 80 100 94 Gentamicin 12 6 100 100 Streptomicin 14 4 99 96 A kezelések során izolált telepek pronáz termelő-képességének eloszlását PF jelű táptalajon vizsgáltuk. Eredményeinket a 3. és 4. sz. táblázatokban foglaltuk össze. A táblázat adataiból megállapítható, hogy a pH = 7,5 értékű és antibiotikumokkal kiegészített Czapek-Dox táptalajokról izolált törzsek pronáz termelő-képessége az eredeti törzs természetes szelekciója révén kapott törzsek termelési szórásához képest pozitív irányba tolódik el. Kilenc törzset tudtunk izolálni, melyeknek termelési értéke 300-350 PUK/ml, értékek között változott. Legmagasabb százalékban a gentamicines kezelésnél kaptunk ilyen enzim-aktivitási határok között pronázt termelő törzseket. 4. példa Az 1. példa szerint Streptomyces fradiae P-102 003 jelű törzs (OKI 00144/1975) spóraszuszpenzióját (spóraszám 6,6 • 104 * * * 8/ ml) MNG kezelésnek vetettük alá, majd a háromszor mosott spóraszuszpenziót a kezelés előtti térfogatra hígítottuk steril fiziológiás konyhasóoldattal, s ezt a spóraszuszpenziót szélesztettük a 3. példa szerint pH = 7,5 értékű Czapek-Dox táptalajra, melynek 45 gentamicin koncentrációja táptalaj milliliterenként 6 egység volt. Az izolált telepek pronáz termelő-képességének eloszlását PF jelű táptalajon végzett fermentációval vizsgáltuk. Eredményeinket az 5. sz. táblázatban foglaltuk össze. A táblázat adatai 50 alapján megállapítható, hogy 4 törzset tudtunk izolálni, melyet termelőképessége 350 PUK/ml-es aktivitási értéknél magasabb volt, valamint, hogy a kezelt és izolált törzsek 44%-a 200 PUK/milliliter vagy ennél több pronáz enzimet termeltek, a szülő 55 törzseknél talált kb. 1%-kal szemben. 5. példa 60 A 4. példában leírt módon izolált PG—02701, PG—02702, PG-02703, PG-02704 jelű Streptomyces fradiae törzsek (melyek közül a PG—02702 jelűt az OKI Mikroorganizmusok Nemzetközi Gyűjteményében 00145/1974 sz. alatt deponáltuk) 65 Czapek-Dox agaron kifejlődött spórás tenyészetéből 3
