172545. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pszeudotriszacharidok előállítására
39 172545 40 D) 5-Epi-gentamicin Cu A C) pontban kapott terméket feloldjuk 10 ml 5%-os nátriumhidroxidban, 4 óra hosszat 100°-on melegítjük, lehűtjük és az oldatot IRC-50 (H forma) műgyantán átbocsátjuk, majd vízzel mossuk, és a terméket 100 ml n ammóniumhidroxid-oldattal eluáljuk. Az alumíniumhidroxidos eluátumot bepárolva 5-epi-gentamicin Cla-t tartalmazó maradékot kapunk. Ezt kovasavgéloszlopon 2:1:1 arányú kloroform-metanol-15%-os ammqniumhidroxid oldószerrendszer alsó fázisával eluálva kromatografálással tisztítjuk. A vékonyrétegkromatográfiásan azonos terméket tartalmazó eluátumokat egyesítjük, majd bepárolva 5-epi-gentamicin Cia't kapunk. Olvadáspontja 145—152°. [a]p6 = +149° (c = 0,55, vízben). E) 1,3,2’,6’,3”-Penta-N-benziloxikarbonil-2”-0-acetil-5-dehidro-gentamicin C3 a 10 g 1,3,2\6’,3”-penta-N-benziloxikarbonil-2”-0- -acetil-gentamicin Cla 600 ml metilénkloriddal készült oldatához argonatmoszférában 11,2 g krómtrioxid-piridin-komplexet adunk. A kapott szuszpenziót visszafolyatási hőmérsékleten forraljuk, majd 22 óra múlva 12,1 g krómtrioxid-piridin-komplexet és 25 óra múlva további 11,2 g krómtrioxid-piridin-komplexet adunk. A reakció vékonyrétegkromatografálással ellenőrzött befejeződése után, körülbelül 28 óra múlva az oldószerből 500 ml-t vákuumban elpárologtatunk, majd 600 ml étert adunk hozzá, és az éteres oldatot a kapott sűrű csapadékról leöntjük, majd 200 ml éterrel mossuk. Az egyesített éteres oldatokat 2 ízben telített nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, 3 ízben n sósavval, majd 2 ízben vízzel mossuk. Ezután nátriumszulfáton szárítjuk, és vákuumban bepárolva maradékként 8,2 g l,3,2’,6’,3”-penta-N-benziloxikarbonil-2”-0-acetil-5-dehidro-gentamicin Cia-t kapunk. Ezután 700 g kovasavgél száraz oszlopon kromatografálással tisztítjuk. Az oszlopot 60%-etilacetát és 40% kloroform elegyével kifejlesztjük, majd a terméket etilacetáttal eluáljuk és az egyesített eluátumokat bepárolva 4,6 g 1,3,2’,6’,3”-penta-N-benziloxikarbonil-2”-0-acetil-5-dehidro-gentamicin Cla-t kapunk. Magmágneses rezonanciaspektruma (3 : 1 arányú CDCl3-CD3OD-ben): 5 2,93 (N-CH3), 1,90 (CH3COO), 1,04 (C-CH3), PPM, CMR (3 : 1 arányú CDCl3-CD3OD-ben): 201 ppm (C=0). A fentiek szerint leírt módon l,3,2’,6’-tetra-N- benz i 1 oxik a r bon il-2’’-O-acetil-3”,4”-N,0-karbonil-gentamicin C!a-t krómtrioxid-piridin-komplexel reagáltatunk. A kapott terméket az előzők szerint elkülönítve és tisztítva l,3,2’,6’-tetra-N-benziloxikarb o n i 1 - 2 ” - O - a ce t i 1 - 3 ” ,4 ” - N ,0-karbonil-5-dehidro-gentamicin Cla-t kapunk. F) 2,1 g l,3,2’,6’,3”-penta-N-benziloxikarbonil-2”-0-acetil-5-dehidro-gentamicin Cia 40 ml vízmentes tetrahidrofuránnal készült oldatához argonatmoszférában 8 ml 1 mólos ,,L-Selectride”-t (lítium-tri-szek-butil-bórhidrid tetrahidrofuránban) adunk. A keveréket nitrogénatmoszférában szobahőmérsékleten 20 óra hosszat keverjük, majd 400 ml vizes nátriumklorid-oldatba öntjük, és 3 ízben 80-80 ml etilacetáttal extraháljuk. Az egyesített etilacetátos kivonatokat kevés nátriumkloridot tartalmazó vízzel mossuk. Ezután nátriumszulfáton szárítjuk és vákuumban bepárolva 2,2 g 1,3,2’, 6’-tetra-N-benziloxikarbonil-3”,4”-N,0-karbonil-gentamicin Cia származékot kapunk, amelyet további tisztítás nélkül a G) pontban felhasználunk. A fenti eljárást 1,3,2’,6’-tetra-N-benziloxikarbonil-2”-O-acetil-3”,4”-N,0-karbonil-5-dehidro-gentamicin Cia-ból kiindulva is végrehajthatjuk és ugyanazt a terméket kapjuk. G) 3”,4”-N,0-Karbonil-5-epi-gentamicin Cla Az F) pontban kapott 2,2 g terméket feloldjuk 20 ml vízmentes tetrahidrofuránban, az oldatot —75 ----85°-ra lehűtjük, és a reakcióedényben 300 ml ammóniát kondenzálunk. Ezután hozzáadunk 2,7 g nátriumot, és a reakciókeveréket 2,5 óra hosszat erőteljesen keverjük. Ezután hozzáadunk 20 ml vizet, és az ammóniát szobahőmérsékletre melegítve elpárologtatjuk. A kapott oldatot 100 ml BioRex 70 kationcserélő műgyantán (FF forma) abszorbeáljuk. A semleges szennyeződéseket 400 ml vízzel kimossuk, majd a terméket 1,5 n ammóniumhidroxiddal eluáljuk. Az ammóniumhidroxidos eluátumokat vékonyrétegkromatografálás alapján egyesítjük, majd vákuumban bepárolva 3”,4”-N,0-karbonil-5-epi-gentamicin Cia-t kapunk, amelyet a H) pont szerinti eljárásban tisztítás nélkül felhasználunk. H) 5-Epi-gentamicin C,a A G) pontban kapott 143 mg 3'\4”-N,0-karbonil-5-epi-gentamicin Cla-t feloldjuk 20 ml 2 n nátriumhidroxid-oldatban. Az oldatot 4 óra hosszat visszafolyatási hőmérsékleten melegítjük, majd szobahőmérsékletre lehűtjük, és BioRex 70 kationcserélő műgyanta oszlopra (100 ml. FT forma) visszük. A semleges sókat 200 ml vízzel kimossuk, majd 200 ml 1,5 n ammóniumhidroxid-oldattal eluáljuk. Az egyesített ammóniumhidroxidos eluátumokat vákuumban bepárolva maradékként 139 mg 5-epi-gentamicin C j a-t kapunk. A terméket 33 g kovasavgélből készült oszlopon 1:1:1 arányú kl o r o f o r m-metanol-tömény ammóniumhidroxid oldószerrendszer alsó fázisával eluálva tisztítjuk. A vékonyrétegkromatográfíásan egységes frakciókat egyesítjük, majd vákuumban bepárolva tiszta 5-epi-gentamicin C, a-t kapunk. Tömegspektruma: m/e 450 (M+H)+ 322, 304, 160, 129. 12. példa Savaddiciós sók A) Szulfátsók (kénsavas addíciós sók) 5,0g 5-epi-gentamicin Ci-t vagy 5-epi-amino-5- -dezoxi-gentamicin Ci-t feloldunk 25 ml vízben és 5 10 IS 20 25 30 35 40 45 50 S5 60 65 20
