172523. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 4-0-(2,6-diamino-2,3,4,6-tetradezoxi-alfa,D-eritrohexo-piranozil)-6-0-(3'-metilamino-3",4",6"-tridezoxi-alfa,D-xilohexopranozil)-2-dezoxi-sztreptamin előállítására
7 172523 8 2. lépés: 2-0-benzil-3-(N-etoxikarbonil-N-metil--amino)-3,4,6-tridezoxi'I>xilohexopiranóz--etilészter. Ásványolajban diszpergált nátrium-hidridből 12 g-ot 300 ml tetrahidrofuránban szuszpendálunk, majd a szuszpenzióhoz keverés közben hozzáadjuk az előző lépésben kapott tennék 57 g-jának 100 ml tetrahidrofuránnal készült oldatát. A reakdóelegyet ezután visszafolyató hűtő alkalmazásával 15 percen át forraljuk, majd 25 C°-ra lehűtjük. A reakcióelegyhez ezt követően 29 ml benzil-bromidot adunk, majd szobahőmérsékleten 15 órán át állni hagyjuk. Ezután vízzel hígítjuk, majd etil-acetáttal extraháljuk. A kapott szerves fázis bepárlása útján olajat kapunk, amelyet szilicium-dioxidon eluálószerként benzol és etil-acetát 8:2 arányú elegyét használva kromatografáljuk. így 60 g mennyisében 65 C° olvadáspontú fehér kristályos csapadék alakjában a dm szerinti vegyületet kapjuk. 3. lépés: 1 -0-acetil-2-0-benzil-3-(N-etoxikarbonil-N-metil-amino)-3,4,6-tridezoxi-D-xilohexopiranóz. 600 ml ecetsav és 60 ml ecetsavanhidrid 25 C° hőmérsékletű elegyén telítődésig gáz alakú hidragén-kloridot vezetünk át, majd az elegyhez az előző lépésben kapott 60 g terméket hozzáadjuk. A reakcióelegyet ezután szobahőmérsékleten 16 órán át állni hagyjuk, miközben a hidrogén-klorid átvezetését fenntartjuk. Ezután a reakdóelegyet vákuumban 40 C°-ot meg nem haladó hőmérsékleten szárazra pároljuk. Az így kapott olajat szilikagélen eluálószerként kloroform és aceton 9 :1 arányú elegyét használva kromatografáljuk, amikor is 60 g mennyiségben fehér kristályos csapadék alakjában a cím szerinti vegyületet kapjuk. A tiszta a-anomer izopropiléterböl végzett átkristályosítással kapható. Olvadáspontja 87 C°. Elemzési eredmények a Ci9H27N06 képlet alapján: számított: C = 62,45%, H = 7,45%, N = 3,83%, talált: C =62,7%, H =7,7%, N = 3,7%. 2. példa 4-0-(2’,6’-diamino-2,,3’,4’,6’-tetradezoxi-a,D-eritrohexopiranozil)-6-0-(3”-metilajnino-3”,4”,6”-tridezoxi-a4)-xilohexopiranozil)-2-dezoxi-sztreptamin-szulfát. Az 1. példában kapott a-anomerből 930 mg-ot feloldunk 15 ml vízben, majd a kapott oldatot semlegesítjük normál kénsavval, a semlegesítést pH-titriméterrel követve. 8,4 ml sav szükséges a semlegesítéshez. A kapott oldathoz ezután aktívszenet adunk, majd a keveréket szüljük és a szűrletet vákuumban betöményítjük. A kívánt szulfátsó kicsapására ezután a koncentrátumhoz metanolt adunk. így 1,24 g mennyiségben Ci9H39Nj06- 5/2 HjSO* összegképletü fehér csapadác formájában a dm szerinti vegyületet kamuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [ ajo = +91° (koncentráló 0,6%, oldószer víz). 3. példa Injektálható készítmény Az 1. példa szerinti termékből 50 mg és 1 ml sterilizált víz összekeverése útján injektálható készítményt kapunk. Az 1. és 2. példa szerinti termékek farmakológiai hatásának vizsgálata. a) In vitro antibakteriális hatás A kísérleti vegyületek in vitro antibakteriális hatását folyékony közegben hígításos módszerrel vizsgáljuk. Kémcsövek sorozatát készítjük elő, melyek mindegyikébe azonos mennyiségű táptalajt mérünk be. Ezután a vizsgálni kívánt vegyületből növekvő mennyiségeket mérünk be a kémcsövekbe, majd a táptalajt beoltjuk a kísérleti baktérium mintájával. 37 C°on 24 vagy 48 órán át végzett inkubálás után a növekvő baktériumokkal szemben kifejtett gátlást átvilágítással figyeljük meg, és így meghatározzuk a kísérleti vegyület itt /ag/cm3 egységben kifejezett minimális gátlási koncentrádóját (MIC-értékét). Az alábbi táblázatokban az 1. példa szerinti terméket „A” terméknek, a 2. példa szerinti terméket pedig „B” terméknek nevezzük. Baktérium-minta „A” termék 24 óra 48 óra Staphylococcus Oxford U.C. 1061 penicillin-érzékeny 0,5 0,5 Staphylococcus aureus U.C. 1128 penicillin-rezisztens 0,5 0,5 Streptococcus hemolyticus 905 20 40 Streptococcus faecalls 5432 100 — Bacillus subtilis 0,02 0,05 Escherichia coli U.C. 1020 2 2 S 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
