172459. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7béta-amino-3-cefém-3-ol-4-karbonsav-származékok előállítására
31 172459 32 tok a szokásos módon, adott esetben alkalmas sóképző csoportok bevezetése útján, például a diasztereomer sók optikailag aktív sóképző szerekkel képezett keverékének előállítása, a keverékek diasztereomer sókká történő szétválasztása, és az elválasztott sók szabad vegyületté végzett átalakítása útján, vagy optikailag aktív oldószerekből végzett frakcionált kristályosítás útján választhatók szét az antipódokra. A találmány szerinti eljárás azt a foganatosítási módot is magában foglalja, amikor a közbenső termékként képződő vegyületeket kiindulási anyagokként használjuk, és a további eljárási lépéseket ezekkel végezzük, vagy pedig az eljárást valamelyik eljárási lépés után megszakítjuk, a kiindulási anyagokat továbbá származékok formájában is használhatjuk, vagy a reakció folyamán is képezhetjük. Előnyösen olyan kiindulási anyagokat használunk, és a reakciókörülményeket úgy választjuk meg, hogy a bevezetőben különösen előnyösnek megnevezett vegyületekhez jussunk. A leírásunkban említett „rövidszénláncú” csoportok - amennyiben azokat közelebbről nem definiáljuk - legföljebb 7, előnyösen legföljebb 4 szénatomosak az acilcsoportok szénatomszáma 20-ig, előnyösen legföljebb 12-ig és elsősorban 7-ig terjedhet. Az alábbi kiviteli példák a találmány szerinti eljárás szemléltetését célozzák, a hőmérsékleti adatok Celsius-fokokban értendők. 1. példa a) 25 ml metanolban oldott, 0,50 g 7(3-amino-cefam-3-on-4£-karbonsav-difenil-metil-észter 4-metil-fenil-szulfonáthoz - amely többségében enolalakban, azaz mint 7/3-amino-3-cefem-3-ol-4-karbonsav-difenil-metil-észter-4-metil-fenil-szulfonát van jelen — 0 C°-on maradandó sárga festődésig dietil-éterben oldott diazo-metánt adunk. 10 percig jeges fürdőben keverjük, majd bepároljuk. A maradékot szilikagélen kromatografáljuk. Toluol-ecetsav 2 :1 arányú keverékkel eluáljuk az olajos 7/3-dimetil-amino-3-ace toxi-3-cefem-4-karbonsav-difenil-metilésztert. Rétegkromatogram (szilikagél, előhívás jódgőzzel): Rf~0,39 (rendszer: ecetsav-etil-észter), ultraibolya abszorpciós spektrum (etanolban): Xmax = 265 mß (e = 6100). infraabszorpciós spektrum (metilén-kloridban): jellemző sávok 3,33, 5,63, 5,81 és 6,23M-nál. Ecetsav-etil-észterrel történő további elucióval olajos 7/3-amino-3-metoxi-3-cefem-4-karbonsav-difenil-metil-észtert kapunk. Vékonyrétegkromatogram (szilikagél, előhívás jódgőzzel): Rf~0,20 (rendszer: ecetsav-etil-észter), ultraibolya abszorpciós spektrum (etanolban): Xmax = 265 mß (e = 5900), infravörös abszorpciós spektrum (metilén-kloridban): jellemző sávok 2,98, 3,33, 5,62, 5,81 és 6,24 ß-näl. Kitermelés : 61 mg. Diazo-metán helyett a a) dimetil-szulfátot is használhatunk vízmentes kálium-karbonát jelenlétében, továbbá a b) l-metil-3-(4-metil-fenil)-triazént, a c) trimetil-oxónium-tetrafluorborátot diizopropil-etil-amin jelenlétében, vagy a d) trifluor-metánszulfonsav-metil-észtert diizopropil-etil-amin jelenlétében a kívánt 7(3-amino-3-metoxi-3-cefem4- -karbonsav-difenil-metil-észter előállítása céljából. Ha ae) diazo-n-butánt, af) l-etil-3-(4-metil-fenil)-triazént, illetve ag) l-benzil-3-(4-metil-fenil)-triazént használunk, úgy analóg módon a következő vegyületeket kapjuk. ae) a 7j3-amino-3-(n-butil-oxi)-3-cefem-4-karbonsav-difenil-metil-észtert, ultraibolya spektruma (etanolban) Xmax = 263nm (e = 7100): infravörös spektruma (metilén-kloridban): sávok 5,63, 5,80, és 6,25 ju-nál, af) a 7ß-amino-3-etil-oxi-3-cefem-4-karbonsav-difenil-metil-észtert, ultaibolya spektruma (etanolban) Xmax = 262 nm (e = 6800): infravörös spektruma (metilén-kloridban): sávok 5,64, 5,78, és 6,24ju-nál: ill. ag) a 70-amino-3-benziloxi-3-cefem-4-karbonsav-difenil-metil-észtert, ultraibolya spektruma (etanolban) Xmax = 258 nm (e = 6800): infravörös spektruma (metilén-kloridban): sávok 5,63, 5,80, és 6,24 /r-nál. A fenti kiviteli példában használt kiindulási anyag például a következőképpen állítható elő: b) 3-Hidroxi-metil-7j3-fenil-acetil-amino-3-cefem-4-karbonsav nyers nátriumsójából (előállítva 3-acetil-oxi-metil-7d-fenil-acetil-amino-3-cefem-4-karbonsav nátriumsójának enzimatikus dezacetilezésével Bacillus subtilis ATCC 6633 törzséből nyert tisztított enzimkivonat segítségével, majd az oldat liofilezésével) 11,82 g-ot feloldunk 200 ml vízben, rárétegezünk 400 ml ecetsav-etil-észtert, és a pH-t vizes foszforsavoldattal 2-re állítjuk be. A vizes fázist leválasztjuk, és újra extraháljuk, 2 x 150 ml ecetsav-etil-észterrel. Az egyesített szerves kivonatokat 4 x 50 ml vízzel mossuk, magnézium-szulfát felett szárítjuk, majd 400 ml-re bepároljuk. Az oldathoz feles mennyiségű diazo-metánt adunk, 3 órán át állni hagyjuk szobahőmérsékleten, majd a szemcsés kristályos csapadékot leszűrjük. A szűrletet 200 ml-re bepároljuk, melegen ciklohexánt adunk hozzá, és szobahőmérsékletre lehűtve egy ideig 4°-on állni hagyjuk. A csapadékot leszűrjük, és aceton-ciklohexán elegyből átkristályosítjuk, a kapott 3-hidroxi-metil-7|3-fenil-acetil-amino-3-cefem-4- -karbonsav olvadáspontja 176—176,5° (korrekció nélkül), [a]D°=— 6° ± 1 (c= 1,231 kloroformban), rétegkromatogram (szilikagél, kimutatás jódgőzzel vagy X2 s4 mn ultraibolya-fénnyel): Rf=0,42 (rendszer: kloroform-aceton 4:1), Rf = 0,43 (rendszer: toluol-aceton 2:1), és Rf=0,41 (rendszer: metilén-klorid-aceton 6:1). 1,03 g 3-hidroxi-metil-7ű-fenil-acetil-amino-3-cefem-4-karbonsav-difenil-metil-észtert és 1,05 g N-metil-N ,N’-diciklo-hexil-karbodiimidium-jodidot nitrogénatmoszférában feloldunk 25 ml abszolút tetrahidrofuránban és 1 óráig 35°-on melegítjük. Ezután újra hozzáadunk 15 ml abszolút tetrahidrofuránban oldott 1,05 g N-metil-N,N’-diciklohexil-karbodiimi-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 16
