172238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás klavicepaminok előállítására
11 172238 12 A kapott nyersterméket 5 ml pH = 7-es foszfát pufferben feloldjuk, az oldhatatlan maradékot szűréssel eltávolítjuk és a tiszta oldat fehérje összetevőit DEAE cellulóz töltetű oszlopon (99 X 2,5 cm) szétválasztjuk. Eluálószerként pH = 7-es foszfát-puffért használunk. Az eluátumból 5—5 ml-es frakciókat szedünk és az 1. példában ismertetett módon vizsgáljuk az egyes frakciók fehérjetartalmát, poliakrilamid gél-elektroforetikus mozgékonyságukat és aminosav-összetételüket, s a klavicepaminokra jellemző lizingazdagságot. 4—16 000 molekulasúly tartományt észleltünk. 6. példa Az 5. példa szerinti módon járunk el, azonban drogként a 112 741 sz. magyar szabadalmi leírásban ismertetett módon termesztett, a Gyógynövény Kutató Intézet által nemesített, BK 1 jelzésű, főként ergotoxint termelő Claviceps purpurea szkleróciumát használjuk. A kapott nyerstermék poliakrilamid gél-elektroforetikus mozgékonysága és aminosav-összetétele azonos az 5. példában kapott értékekkel. 7. példa Az 5. példa szerinti módon járunk el, azonban drogként 10 g, Paspalum disticum növényen kapott Claviceps paspali ATCC 13 892 törzs szkleróciumát használjuk fel. Ily módon 8 mg száraz, nyers preparátumot kapunk, amelynek jellemzői azonosak az 5. példában kapott termékével. 8. példa A 7. példa szerinti módon járunk el, azonban drogként a Claviceps paspali ATCC 13 893, ATCC 13 894 és 5 ATCC 13 895 törzs szkleróciumát használjuk fel. A kapott nyers preparátumok jellemzői azonosak az 5. példában kapott termék jellemzőivel. 1. táblázat 10 A klavicepamin frakciók elektroforetikus mozgékonyságának összehasonlítása más ismert bázikus fehérjékkel Fehérjék Távolság a starttól Távolság a citokróm C-től cm Lizingazdag hiszton (fi) 2,2-0,8 Citokróm C 3,0 0,0 Ribonukleáz 3,2 + 0,2 Protamin (szalmin) 6,5 + 3,5 Klavicepamin 1. frakció 5,0 + 2,0 2. frakció 5,5 + 2,5 3. frakció 5,8 + 2,8 4. frakció 6,0 + 3,0 5. frakció 6,5 + 3,5 6. frakció 7,0 + 4,1 7. frakció 7,3 + 4,3 8. frakció 7,5 + 4,5 9. frakció 7,7 + 4,7 [15% akrilamid, acetát-puffer (pH 2,7), 130 V, 2,5 óra] 2. táblázat A klavicepamin frakciók aminosavösszetétele más ismert fehérjék aminosav összetételével összehasonlítva Aminosav Protamin Ribonukleáz Hiszton fl Klavicepamin frakciók l. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Asp 15,0 2,5 8,6 8,4 7,2 3,4 3,0 2,0 2,1 1,5 1,0 Thr 8,9 5,6 7,1 7,0 6,7 4,4 1,5 2,5 0,8 1,6 1,5 Ser 7,2 11,4 5,6 6,7 6,7 5,0 3,9 3,7 3,5 0,9 1,0 Glu 12,4 3,7 7,8 7,0 4,7 2,6 2,2 2,0 1,6 1,9 1,0 Pro 6,9 3,9 9,2 5,1 4,0 4,9 2,6 2,0 1,8 0,5 Gly 3,1 1,6 7,2 9,9 8,0 8,4 4,4 3,5 3,4 1,0 1,0 0,8 Alá 0,8 7,6 24,3 11,1 10,0 9,0 2,9 2,2 2,2 1,0 1,0 0,5 Val 7,4 5,4 5,6 3,0 3.0 2,5 2,1 2,2 1,4 1,0 1,0 0,5 He 1,2 2,0 1,5 3,9 2,0 2,6 3,0 0,7 1,4 1,0 0,8 0,8 Leu 2,6 4,5 5,1 5,0 2,0 1,9 1,6 1,5 1,0 1,0 0,6 Met 4,0 Tyr 7,6 0,9 0,6 0,4 0,4 0,5 nyom 0,4 Phe 3,5 0,9 2,0 1,0 1,0 1,0 1,0 0,8 Cys 7,0 Lys 10,5 26,8 31,8 35,6 43,2 58,6 68,1 72,1 86,8 88,3 92,8 His 4,2 2,5 2,7 1,8 1,5 1,5 1,2 0,5 1,5 0,5 Arg 86,4 4,9 1,8 2,1 2,3 1,2 1,5 1,0 0,8 1,0 MMA 0,6 1,5 1,5 1,2 1,5 DMA 1,0 1,5 0,5 0,6 DMA' 0,8 0,6-MMA =N6-monometil-argmin DMA = N6,N6-dimetil-arginirt DMA' = N6,N'6-dimetil-arginin 6
