172238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás klavicepaminok előállítására
13 172238 14 3. táblázat A klavicepamin frakciók molekulasúlyának összehasonlító vizsgálata gélréteg-kromatográfiával Fehérjék Ismert molekula súly Számított átlagos molekulasúly Protamin (szalmin) 4 249 Citokróm C 13 400 Ribonukleáz 14 200 Lizingazdag hiszton (fi, borjú thymus) 21 000 Klavicepamin 1. frakció 17 400 2. frakció 16 000 3. frakció 14 700 4. frakció 12 900 5. frakció 11 000 6. frakció 10 000 7. frakció 8 700 8. frakció 6 700 9. frakció 3 500 [Gélréteg: 0,5 mm Sephadex G 50 (superfine); Puffer: 0,9‘%-os NaCl oldat; Futási idő: 3 óra] Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás 3500—18 000 molekulasúlyú, lizinben gazdag bázikus fehérje-elegy, azaz klavicepamin-elegy és adott esetben az elegy egy vagy több komponensének, a klavicepamin 16 900—18 000 molekulasúlyú 1., 15 200—16 900 molekulasúlyú 2., 13 500—15 200 molekulasúlyú 3., 11 800—13 500 molekulasúlyú 4., 10 200—11 800 molekulasúlyú 5., 9 000—10 200 molekulasúlyú 6., 7 000— 9 000 molekulasúlyú 7., 5 600— 7 000 molekulasúlyú 8. és/vagy 3 500— 5 600 molekulasúlyú 9. frakciójának az előállítására, azzal jellemezve, hogy a Claviceps purpurea MNG 22/1964 vagy MNG 56/1970 törzs vagy a Claviceps fusiformis MNG 68/1971 törzs szűrt fermentlevéből vagy az említett törzs micéliumának vagy szkleróciumának vagy a lizergsavamidot termelő Claviceps paspali ATCC 13 892, ATCC 13 893, ATCC 13 894 vagy ATCC 13 895 törzs szkleróciumának adott esetben valamely szerves oldószerrel végzett zsírmentesítés után készített vizes, vizes sav-oldatos, vizes só-oldatos vagy alkoholos extraktumából a klavicepamin-elegyet és az egyéb nagy molekulasúlyú kísérőanyagokat valamely szerves oldószerrel, valamely szervetlen sóval vagy triklórecetsawal kicsapjuk, a csapadékot előnyösen szűréssel elválasztjuk, majd a klavicepamin-elegyet ionszegény vízzel, híg, vizes só-oldattal vagy foszfát-puffer-oldattal szelektíven kioldjuk, az oldatból valamely fehérjekomplexképző oldat, előnyösen vizes Reinecke-só oldat vagy valamely szerves oldószer, előnyösen etanol hozzáadásával kicsapjuk, a csapadékot elválasztjuk és adott esetben tovább tisztítjuk és adott esetben az elegyel frakciókra bontjuk. (Elsőbbsége: 1975. június 26.) 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja 3500—18 000 molekulasúlyú, lizinben gazdag bázikus fehérje-elegy azaz klavicepamin-elegy és adott esetben egy 17 400 átlagos molekulasúlyú, 11 000 átlagos molekulasúlyú és 10 000 átlagos molekulasúlyú klavicepamin frakció előállítására, azzal jellemezve, hogy a Claviceps purpurea MNG 22/1964 vagy MNG 56/1970 törzs vagy a Claviceps fusiformis MNG 68/1971 törzs szűrt fermentlevéből vagy az említett törzs micéliumának vagy szkleróciumának vagy a lizergsavamidot termelő Claviceps paspali ATCC 13 892, ATCC 13 893, ATCC 13 894 vagy ATCC 13 895 törzs szkleróciumának adott esetben valamely szerves oldószerrel végzett zsírmentesítés után készített vizes, vizes sav-oldatos, vizes só-oldatos vagy alkoholos extraktumából a klavicepamin-elegyet és az egyéb nagy molekulasúlyú kísérőanyagokat valamely szerves oldószerrel, valamely szervetlen sóval vagy triklórecetsavval kicsapjuk, a csapadékot előnyösen szűréssel elválasztjuk és adott esetben frakciókra bontjuk. (Elsőbbsége: 1972. december 8.) 3. A 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a micélium vagy a szklerócium vagy ezek szerves oldószerrel zsírmentesített maradékának extrakcióját valamely híg vizes oldattal, előnyösen híg vizes perklórsav-oldattal vagy híg vizes só-oldattal végezzük. (Elsőbbsége: 1972. december 8.) 4. A 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a szűrt fermentléhez 0,5—15-szörös, előnyösen 1—12-szeres térfogatú szerves oldószert adunk. (Elsőbbsége: 1972. december 8.) 5. A 4. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a szűrt fermentléhez a szerves oldószert két részletben adjuk. (Elsőbbsége: 1972. december 8.) 6. Az 5. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a szűrt fermentléhez első részletben 2—4-szeres térfogatú szerves oldószert adunk, a kivált, főleg poliszacharidokat és nagymolekulasúlyú fehérjéket tartalmazó csapadékot elvetjük, majd a tiszta oldathoz további 8—10-szeres térfogatú szerves oldószert adunk. (Elsőbbsége: 1972. december 8.) 7. A 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy szervetlen sóként ammónium-szulfátot alkalmazunk. (Elsőbbsége: 1972. december 8.) 8. A 7. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a szervetlen sót több, előnyösen 3—4 lépésben adagoljuk és 10—50 súly% mennyiségben alkalmazzuk. (Elsőbbsége: 1972. december 8.) 9. A 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a triklórecetsavat a fermentlére számított 20—30 súly% mennyiségben alkalmazzuk. (Elsőbbsége: 1972. december 8.) 10. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a szelektív kioldást a csapadékra számított 4—15-szörös, előnyösen 4—11-szeres térfogatú ionszegény vízzel, vagy híg vizes oldattal végezzük. (Elsőbbsége: 1975. június 26.) 11. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a klavicepamin-elegyet tartalmazó oldathoz 1: 2—2: 1, előnyösen 1: 1 térfogatarányú 1—5% Reinecke sót tartalmazó vizes oldatot adunk. (Elsőbbsége: 1975. június 26.) 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
