172238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás klavicepaminok előállítására
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS SZOLGÁLATI TALÁLMÁNY 172238 ÆÈL Nemzetközi osztályozás: w Bejelentés napja: 1972. XII. 8. (GO—1226) Módosítási elsőbbsége: 1975. VI. 26. (8726/75) C 12 D 13/06 ORSZÁGOS Közzététel napja: 1978. II. 28. /?0''‘ 1 TALÁLMÁNYI HIVATAL 1 *•■&*** Megjelent: 1979. V. 31. Feltalálók: Tulajdonos: Tyihák Ernő oki. vegyészmérnök, 40%, Richter Gedeon Molnár György oki. kertészmérnök, 20%, Vegyészeti Gyár R. T., Budapest Patthy András oki. gyógyszerész, 10%, dr. Szende Béla orvos, 10%, dr. Kopper László orvos, 10%, dr. Lapis Károly orvos, 10%, Budapest Eljárás klavicepaminok előállítására 1 2 A találmány tárgya eljárás a Claviceps-fajok által termelt új vegyületcsoport előállítására. A vegyületcsoport tagjai lizinben gazdag bázikus fehérjék, melyeket a Claviceps-fajok termelnek. Képződésükkel fokozatosan visszaszorítják a gombasejtek szaporodását, a tenyészetből kinyerve sejtszaporodást gátló hatásuk más organizmuson is érvényesíthető, így tumorgátló hatás kifejtésére képesek. A termelő mikroorganizmus és a termék fehérje természete alapján elnevezésük a továbbiakban: klavicepamin. A növényvilág különböző fejlettségi rendű képviselőiből korábban állítottak már elő fehérje jellegű tumorgátló hatású anyagokat, mint például a fehér fagyöngy (Viscum album), a cékla (Béta vulgaris var. conditiva) vagy az afrikai hagyma fehérjéi (646 095 sz. belga és 15 158 949 sz. magyar szabadalmi leírás). Ezek a fajonként különböző fehérjék egymástól és a találmány tárgyát képező klavicepamintól kémiai felépítésükben lényegesen eltérnek, lizin-tartalmuk ugyanis alacsony, 30% alatti és sehol sem található utalás arra, hogy metilezett 20 arginint tartalmaznának; közös kémiai jellemzőjük csupán bázikus voltuk. A találmány célkitűzése a sejtek szaporodását gátló olyan új vegyületcsoport előállítása, amely ipari méretekben, nagy mennyiségben, egyszerű módon állítható elő, szemben az eddig ismert és a gyógyászatban alkalmazott növényi eredetű tumorgátló anyagokkal, amelyeknek nyersanyagforrása véges és ily módon az igények kielégítésére nem elegendő. A találmány alapja az a felismerés, hogy Claviceps tenyészetekből az eukarióta sejtek fiziológiájából ismert különböző bázikus fehérjéken (például hisztonok, protaminok) túlmenően további bázikus fehérjék izolálha- 5 tók. Alapja az a felismerés, hogy a fenti bázikus fehérjék lizinben oly mértékig gazdagok, hogy lizintartalmuk meghaladhatja az irodalomban eddig ismertetett valamennyi természetes eredetű lizinben gazdag bázikus 10 fehérje (például fi hiszton) lizin szintjét. Alapja az a felismerés, hogy a gomba tenyésztése során e bázikus fehérjék mennyisége a növekedési szak után rohamosan nő, és képződése a csökkenő sebességű növekedési szakra, illetve a növekedés megszűnése utáni fermentációs szakra jellemző. Végül alapja az a felismerés, hogy e fehérjéket a fermentléből kinyerve, a sejtszaporodást gátló hatás idegen organizmuson, például különböző állati tumorszövetek sejtjein is érvényesül. A találmány szerinti új vegyületcsoport kémiai tulajdonságainak bemutatására egy rozseredetű Claviceps purpurea törzs 24 napos felületi tenyészetét feldolgoztuk és a termelt klavicepamint kinyertük. A felületi tenyészet szárított anyagát hűtött lúgos acetonnal alkaloid- és 25 zsírmentesítettük. A visszamaradó acetonport perklórsavval extraháltuk. Az extraktumból a klavicepamint triklórecetsav adagolásával csaptuk ki. A kivált csapadékot alkohollal és acetonnal mostuk és szárítottuk, majd fiziológiás sóoldatban oldva dextrán gél oszlopon 30 (Sephadex G50) frakcionáltuk. Az elválasztás fiziológiás 172238 1
