172223. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy diszulfidhídon kívól legalább egy ciszteingyököt tartalmazó peptidek előállítására
9 172223 10 tett elegyét 10 perc leforgása alatt erőteljes keverés közben 18 ml jóddal telített metilénklorid és 180 ml trifluoretanol elegyéhez adjuk. Két perccel a bevitel befejezése után 3,2 g aszkorbinsav 60 ml vízzel készített oldatát és 30 ml 1 mólos ammóniumacetátot adunk az elegyhez, a kapott oldat pH-ját hígított ammóniával 5,6 értékre állítjuk be és csökkentett nyomáson a trifluoretanolt legnagyobb részben eltávolítjuk. Az elegyet ezután 100 ml (95: 5 arányú) kloroform—metanol elegyben felvesszük és a szerves fázist vízzel kétszer mossuk, majd vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk és bepároljuk, végül a cím szerinti terméket Sephadex-LH 20-on (oszlop: 2 x 100 cm) gélfiltrálással tisztítjuk. Eluálószer (1 : 1 arányú): kloroform—metanol. Vékonyrétegkromatogramban szilikagélen Rrl00 = =0,32; Rf52 =0,35. A kiindulási anyagként használt peptidet a következő módon állítj uk elő : 1. Trt-Cys(Trt)-Cys(Acm)-OMe 7,0 g Trt-Cys(Trt)-OSu-t és 2,0 g H-Cys(Acm)-OMe-t 50 ml kloroformban 20 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Az oldatot ezután 100 ml kloroformmal hígítjuk és 1 n citromsavoldattal, 1 n nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és vízzel mossuk, nátriumszulfát felett szárítjuk és bepároljuk. A maradékot etilacetát—éter elegyből átkristályosítjuk. Op. 197—198°. 2. Trt-Cys(Trt)-Cys(Acm)-OH 5,63 g Trt-Cys(Trt)-Cys(Acm)-OMe-t 75 ml dioxánban oldunk, az oldathoz óvatosan 17,5 ml vizet és 3,71ml 2 n nátriumhidroxidot adunk. Az oldatot 1 óra múlva 20°-ról 0°-ra hűtjük, 3,71 ml 2 n sósavat adunk hozzá, az oldatot ezután csökkentett nyomáson és szobahőmérsékleten körülbelül 30 ml-re betöményítjük és ezt követően 200 ml kloroformmal hígítjuk. A kapott oldatot vízzel háromszor mossuk és vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk. Az oldószer lepárlása után a vékonyrétegkromatográfiásan tiszta terméket fehér hab alakjában kapjuk. Vékonyrétegkromatogramban szilikagélen Rf45 = =0,45; Rnoo "0,65. 3. Z-Thr(But)-Ser(But)-OMe 200 ml etilacetáthoz hozzáadunk 16,25 g Z-Thr(But)-QSu-t és 8,47 g H-Ser(But)-OMe.HCl-t, az elegyhez 0°-on hozzáadunk 5,6 ml trietilamint és az egészet 15 óra hosszat 20°-on keverjük, majd 1 n citromsav-oldattal, 1 n nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és vízzel mossuk. Vízmentes nátriumszulfát feletti szárítás után az oldatot bepároljuk és a vékonyrétegkromatográfiásan tiszta terméket olajként kapjuk. Vékonyrétegkromatogramban szilikagélen Rf =0,60 (95 : 5 arányú) kloroform—metanol elegyben és Rf=0,75 (1: 1 arányú) toluol—aceton elegyben. 4. H-Thr(But)-Ser(But)-OMe 3,27 g Z-Thr(But)-Ser(But)-OMe-t 50 ml ecetsavetilészterben 0,5 g palládiumszén (10%) jelenlétében hidrogénezünk. A hidrogénfelvétel befejeződése után (1 óra) a katalizátort szűréssel elkülönítjük és az oldatot betöményítjük. Az olajként keletkező termék vékonyrétegkromatográfiásan egységes. Vékonyrétegkromatogramban szilikagélen Rf =0,30 (95 : 5 arányú) kloroform—metanol elegyben. 5. Trt-Cys(Trt)-Cys(Acm)-Thr(But)-Ser(But)-OMe 5,43 g Trt-Cys(Trt)-Cys(Acm)-OH-t és 2,33 g H-Thr(But)-Ser(But)-OMe-t 70 ml ecetsavetilészterben oldunk és 0°-on 1,55 g diciklohexilkarbodiimidet és 1,02 g N-hidroxibenzotriazolt adunk az oldathoz. Az oldatot 4 óra hosszat 0°-on és 17 óra hosszat 4°-on tartjuk, utána szűrjük, majd 200 ml ecetsavetilészterrel hígítjuk, 1 n citromsav-oldattal, 1 n nátriumhidrogénkarbonátoldattal és vízzel mossuk. Ezt követően az oldatot vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk, majd bepároljuk és a maradékot etilacetát-petroléter elegyből kicsapjuk. Vékonyrétegkromatogramban szilikagélen Rf =0,60 (1 : 1 arányú) toluol—aceton elegyben és Rf =0,45 ecetsavetilészterben. 6. Trt-Cys(Trt)-Cys(Acm)-Thr(But)-Ser(But)-NHNH2 4,7 g Trt-Cys(Trt)-Cys(Asm)-Thr(But)-Ser(But)-OMe-t 11 ml metanolban 2,2 ml hidrazinhidrát hozzáadása után 6 l/2 órán át szobahőmérsékleten állni hagyunk. A hidrazidot 50 ml jéghideg vízzel kicsapjuk, leszívatjuk és vízzel alaposan átmossuk. A megszárított nyersterméket 80 ml forró toluolban oldjuk, kissé betöményítjük és 60°-on 80 ml hexánt adunk hozzá. Az egészet lassan 0°-ra hűtjük, a kivált terméket leszívatjuk, 1 : 2 arányú toluol—hexán eleggyel és hexánnal mossuk. Kitermelés 4,06 g. Vékonyrétegkromatogramban Rf =0,26 kloroform— metanol elegyben. 7. Z-Ser(But)-Leu-OMe 5,9 g Z-Ser(But)-OH 20 ml ecetsavetilészterrel készített oldatához 10 -on 2,75 ml trietilamint és 2,63 ml klórhangyasav-izobutilésztert adunk. Az elegyhez 10 perc múlva 4,0 g H-Leu-OMe.HCI-t és 3,05 ml trietilamint adunk, majd 1 V2 óra hosszat jeges fürdőben keverjük, foszforsavval és nátriumhidrogénkarbonát-oldattal kirázzuk, vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk és utána az ecetsavetilésztert teljesen lepároljuk. Ily módon 8,2 g viaszszerű anyagot kapunk. Op. 56—58° (hexánból való átkristályosítás után). Vékonyrétegkromatogramban szilikagélen Rf =0,58 ecetsavetilészterben. 8. Trt-Cys(Trt)-Ser(But)-Leu-OMe 8,5 g fenti dipeptidet 130 ml ecetsavetilészterben oldunk, az oldatot 0°-ra hűtjük és hozzáadunk 19,4 ml 1 n sósavat, valamint 0,6 g 10%-os palládiumszenet és hidrogénezzük. Ezután a katalizátort szűréssel elkülönítjük és az ecetsavetilésztert lepároljuk, a maradékot 60 ml metilénkloridban felvesszük, majd 14,7 g Trt-Cys(Trt)-OSu-t és 2,2 ml N-metilmorfolint adunk hozzá. Az elegyet 48 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk, utána ecetsavetilészterrel hígítjuk, majd hideg, hígított foszforsavval és nátriumhidrogénkarbonát-oldattal kirázzuk. Az oldószert szárítás után lepároljuk és 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
