172223. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy diszulfidhídon kívól legalább egy ciszteingyököt tartalmazó peptidek előállítására
11 172223 12 a kapott maradékot (20: 20: 1 arányú) metanol— —hexán—víz rendszerben Craig-elosztás útján 600 lépcsőben tisztítjuk, k -0.33. Ily módon 10,1 g színtelen habot kapunk. Vékonyrétegkromatogramban szilikagélen Rf =0,46 (1:1 arányú) ecetsavetilészter—hexán elegyben. 9. Bpoc-I le-Cys(Trt)-Ser(But)-Leu -O Me 1.72 g fenti, védett tripeptidet szobahőmérsékleten 17,2 g jégecetben oldunk, az oldathoz 4.2 ml vizet adunk és az egészet 30 percen keresztül keverjük, majd 5 ml jégecetet adunk hozzá és fagyasztva szárítjuk. A maradékot 35 ml 70%-os terc-butanolban szuszpendáljuk, még 5 ml vizet adunk hozzá, a trifenilkarbinolt szűréssel elkülönítjük és a szűrletet újból fagyasztva szárítjuk. Ily módon 1,3 g fehér port kapunk, Rf =0,30 ecetsavetilészterben, amelyet a következő módon készített kevert anhidridhez adunk : 830 mg Bpoc-Ile-OH 4 ml dimetilformamidban való oldása után az oldathoz — 15°-on 0,25 ml N-metilmorfolint és 0,295 ml klórhangyasavizobutilésztert adunk. Ehhez hozzáadjuk 10 perc elteltével a fent kapott tripeptidet, majd 0,166 ml N-metilmorfolint és 4 ml dimetilformamidot adunk még az elegyhez. Az így előállított elegyet éjszakán át 0°-on állni hagyjuk, a terméket jéghideg vizes káliumhidrogénkarbonát-oldatba való csepegtetés útján kicsapjuk, a csapadékot leszívatjuk, vízzel alaposan átmossuk és 40°-on szárítjuk. A kapott tennék (1,98 g) elég tiszta a további felhasználásra, de metanol—víz elegyből át is kristályosítható. Op. 175—177°. Vékonyrétegkromatogramban szilikagélen Rf =0,55 (8: 2 arányú) ecetsavetilészter—hexán elegyben. 10. Trt-Cys(Trt)-Cys(Acm)-Thr(But)-Ser(But)-Ile-Cys(Trt)-Ser(But)-Leu-OMe 5,1 g Bpoc-lle-Cys(Trt)-Ser(But)-Leu-OMe-t 44 ml jégecetben és 11 ml vízben 18 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyunk. Az elegyet 20 ml jégecet hozzáadása után iioíilizáijuk, utána még kétszer fagyasztva szárítjuk terc-butanolból. A ragadós anyagot 10 ml éterrel eldörzsöljük, 70 ml hexán hozzáadása után leszivatjuk és 1: 9 arányú éter—hexán eleggyel mossuk. Kitermelés 2,92 g. Vékonyrétegkromatogramban szilikagélen Rf =0,16 ecetsavetilészterben. 3,96 g Trt-Cys(Trt)-Cys(Acm)-Thr(But)-Ser(But)-NHNH2-t 15 ml dimetilformamidban viszünk és —30°-on 3,3 ml 3,3 n dioxánban oldott sósavat és —15°on 0,56 ml terc-butilnitrilt adunk hozzá. Az elegyet 15 percig —20°-on tartjuk, utána hozzáadjuk a fenti tetrapeptidet, majd még 2,4 ml N-metilmorfolint adunk hozzá és 0°-on éjszakán át állni hagyjuk. A jéghideg vízzel kicsapott nyersterméket szárítás után 8 : 2 arányú etilacetát—hexán eleggyel 290 g kovasavgélen kromatografáljuk. A vékonyrétegkromatográfiásan tiszta frakciókat egyesítjük és szárazra pároljuk. Ily módon 4,6 g fehér port kapunk. Vékonyrétegkromatogramban szilikagélen Rf=0,38 ecetsavetilészterben. 11. Trt-Cys(Trt)-Cys(Acm)-Thr(But)-Ser(But)-Ile-Cys(T rt)-Ser(But)-Leu-OH 3,6 g Trt-Cys(Trt)-Cys(Acm)-Thr(But)-Ser(But)-Ile-Cys(Trt)-Ser(But)-Leu-OMe-t 50 ml dioxánban oldunk, az oldathoz ezután 17 ml vizet és 4 ml 1 n nátriumhidroxid-oldatot adunk. Az elegyet 1 óra hosszat 20°-on tartjuk, utána 0°-ra lehűtjük és cseppenként 4 ml 1 n sósavat adunk hozzá. Ezt követően 20°-on és csökkentett nyomáson a dioxánt a lehető legnagyobb mértékben lepároljuk, a maradékhoz 20 ml vizet adunk, a keletkező csapadékot szűréssel elkülönítjük és szilárd káliumhidroxid felett szárítjuk. Vékonyrétegkromatogramban szilikagélen Rf45 =0,55 és Rf3 =0,60. 12. H-Cys(Trt)-Cys(Acm)-Thr(But)-Ser(But)-Ile-Cys(Trt)-Ser(But)-Leu-OH.2 HC1 6,94 g Trt-Cys(Trt)-Cys(Acm)-Thr(But)-Ser(But)-Ile-Cys(Trt)-Ser(But)-Leu-OH-t 72 ml trifluoretanolban oldunk, az oldathoz 8 ml vizet adunk és az oldat pH-ját 1,2 n sósavval 90%-os trifluoretanolban 4,0 értékre állítjuk és egy pH-állapotjelző segítségével ezen a saverősség-értéken tartjuk. Az elegyhez 50 perc múlva 50 ml terc-butanolt adunk, a trifluoretanolt csökkentett nyomáson lepároljuk és az oldatot Iioíilizáijuk. Rf3 =0,40. 2. példa 1-------------------------------1 H-Cys-Cys-Thr(But)-Ser(But)-lle-Cys-Ser(But)-Leu-OMe Boc-Ala-Cys-OMe Az 1. példában kapott H-Cys-Cys(Acm)-Thr(But)------------------1-Ser(But)-Ile-Cys-Ser(But)-Leu-OH- metanolban oldjuk, amely egy egyenértéknyi mennyiségű klórhidrogént tartalmaz, és éteres diazometán-oldat segítségével metilészterré alakítjuk. A metilészter vékonyrétegkromatogramban szilikagélen (85 : 15 arányú) kloroform—metanol rendszerben 0,32 Rf-értéket mutat. 55 mg ily módon kapott oktapeptidmetilészter-hidrokloridot és 19 mg Boc-Ala-Cys(Acm)-OMe-t 8,5 ml metanolban oldunk és az oldathoz 1,5 ml 0,5 mólos metanolban oldott jódot adunk. Az elegyet 10 perc múlva szobahőmérsékleten 30 ml 1%-os vizes aszkorbinsav-oldatba, amely 260 mg ammóniumacetátot tartalmaz, csepegtetjük. A becsepegtetés során a cím szerinti termék kicsapódik kis mennyiségű két szimmetrikus diszulfíddal, azaz az alábbi képletű, I és II diszulfiddal együtt. !--------------------------------------i I = H-Cys-Cys-Thr(But)-Ser(But)-Ile-Cys-Ser(But)-Leu-OMe H-Cys-Cys-Thr(But)-Ser(ButHle-Cys*Ser(But)' I--------------------------- ---------I-Leu-OMe; 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
