172209. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az antraciklin-glikozidjellegű aklacinomicin a és b tumorellenes antibiotikum előállítására
n 172209 12 szilikagél lemezre (Kieselgel 60F254, Merck Co.) cseppentjük fel. A lemezt a futtató edényben 15 percig telítjük a gőzökkel, majd a vékonyréteg-lemezt acetonban, 15 cm magasságig, szobahőmérsékleten felfuttatjuk. Az aklacinomicin A-nak és B-nek megfelelő foltokat 430 mm-nél mért optikai sűrűségük alapján egy Shimadzu-féle TLC-Scanner (CS—900-as modell) segítségével határozzuk meg. A műszer beállítása: cikkcakk scanning 430 mm-től 700 mm-ig, résszélesség: 1,25 X X 1,25 mm, letapogatás és papírsebesség: 10 mm/perc. Előzőleg elkészítjük a 0,2—15 mikrogramm/folt koncentrációjú tiszta aklacinomicin A és B összehasonlító görbéket. Rázott tenyészetben először a következő táptalajon tenyésztettük az aklacinomicint termelő törzset: Az alapközeg 1% glükózt, I/o burgonyakeményítőt, 1,5% „Prorich”-et (szójaliszt, az Ajinomoto Co. terméke), 0,1% kálium-dihidrogénfoszfátot, 0,1% magnézium-szulfát-heptahidrátot, 0,3% nátrium-kloridot- 0,0007% réz(II)-szulfát-pentahidrátot, 0,0001% vas(II)szulfát-heptahidrátot, 0,0008% mangán(II)klorid-tetrahidrátot és 0,0002% cink-szulfát-pentahidrátot tartalmazott, és pH-ját 7,0-re állítottuk be. A 4. napig 45 mikrogramm/ml aklacinomicin A és 15 mikrogramm/ml aklacinomicin B halmozódott fel a tenyészlében. Rázott körülmények között, különböző szén- és nitrogénforrásokat tartalmazó táptalajokon a következőkben leírt példák szerint állítottunk elő aklacinomicin A-t és B-t : 1. 1,5% „Prorich”-et és más sókat tartalmazó alapközeghez különböző szénforrásokat adtunk: Az elegyben jelenlevő aklacinomicin A mennyisége a megadott idő eltelte után 2 nap 3 nap 4 nap PH ml pH ml pH ml 2% glükóz 7,3 27 7,4 38 8.0 41 2% maltóz 6,6 15 6,0 28 7,0 32 2% szacharóz 7,3 32 7,7 39 8,2 40 2% oldható keményítő 7,4 35 7,4 28 7,9 33 2% burgonyakeményítő 7,2 36 7,6 33 8,1 42 1% glükóz -P1% burgonyakeményítő 6.3 32 7,7 34 8,3 43 1% glükóz +1% szacharóz 7,3 26 7,6 30 7,8 32 1% glükóz +1% oldható keményítő 7,1 37 7,9 37 8,4 39 1% glükóz +1% glicerin 4,9 36 6,3 36 8,1 41 2. 1% glükózt, 1% burgonyakeményítőt és más sókat tartalmazó alapközeghez különböző nitrogénforrásokat adtunk: Az elegyben jelenlevő aklacinomicin A mennyisége a megadott idő eltelte után 2 nap 3 nap 4 nap PH ml pH ml PH ml 1,5% „Prorich” (szójaliszt, Ajinomoto Co.) 6,3 34 7,0 48 8,0 45 1,5% „Meat” (szójaliszt, Ajinomoto Co.) 5,8 37 7,1 54 8,1 48 1,5% malátakivonat 6,2 9 6,6 7 6,6 13 1,5% élesztőkivonat 5,4 45 7,7 43 8,5 40 1,5% kazein hidrolizátum 6,9 18 8,0 21 8,3 22 1,5% marhahúskivonat 5,6 9 7,2 32 8,2 36 1,5% polipepton 6,2 38 8,2 28 8,6 23 3. Az alapközegben levő szén- és nitrogénforrás koncentrációjának variálásával az aklacinomicin A és B a következőképpen halmozódott fel: Szénforrás % Glükóz 1 2 3 Burgonyakeményitő 1 2 3 A* B A B A B „Prorich” 1,5% 33 23 36 19 2,5% „Meat”** 31 39 39 28 51 34 1,5% 32 19 48 31 — — 2,5% 17 24 43 28 58 29 * aklacinomicin A vagy B: mikrogramm/ml * * „Meat” a szójaliszt kereskedelmi neve. A fenti eredmények csupán például szolgálnak, és azt mondhatjuk, hogy az aklacinomicin termelésénél szénforrásként például glükóz, keményítő, maltóz és szacharóz előnyös, nitrogénforrásként pedig például a szójaliszt, az élesztőkivonat, a marhahúskivonat és a pepton alkalmas. Amikor 28 C°-on, rázatva, az egyik alkalmas táptalajon (2% glükóz, 2% burgonyakeményítő, 2,5% „Meat”, 0,1% kálium-dihidrogénfoszfát, 0,1% magnézium-szulfát-heptahidrát, 0,0007% réz(H)szulfát-pentahidrát, 0,0001% vas(ll)szulfát-heptahidrát, 0,0008% 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
