172209. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az antraciklin-glikozidjellegű aklacinomicin a és b tumorellenes antibiotikum előállítására
9 172209 10 J MA144—Ml Streptomyces galilaeus ISP 5481 1. 2. irodalmi idézet Oldódó színanyag barna barna halványbama halványsárga Melaninképződés ISP 1. sz. közeg pozitív pozitív pozitív pozitív ISP 6. sz. közeg pozitív valószínűleg pozitív pozitív pozitív ISP 7. sz. közeg pozitív pozitív pozitív pozitív Keményítőhidrolízis gyenge gyenge gyenge * Zselatin elfolyósítás gyenge * Zselatin ferdeagaron gyenge gyenge Glükóz-peptonzselatin gyenge—mérsékelt gyenge— ferdeagaron mérsékelt Tej peptonizálás mérsékelt—erős mérsékelt negatív * Tej koagulálás negatív negatív gyenge * Nitrát redukció pozitív pozitív * * Szénhidrát hasznosítás: L-arabinóz pozitív pozitív pozitív D-xilóz pozitív pozitív pozitív glükóz pozitív pozitív pozitív D-fruktóz pozitív pozitív pozitív szacharóz pozitív pozitív pozitív inozit pozitív pozitív pozitív L-ramnóz pozitív pozitív pozitív raffinóz pozitív pozitív pozitív D-mannit negatív negatív negatív * Nincs adat. Ezen eredmények szerint, morfológiailag, a növekedés és a micélium különböző táptalajokon megfigyelt színe és az élettani tulajdonságok alapján a törzs nagyon jól egyezik a S. galilaeus ISP 5481 jelű törzzsel. A két törzs 35 ezenkívül a fermentációs termékek tekintetében is hasonlít egymásra; törzsünk egyik mellékterméke a cinerubin, amelyet a S. galilaeus is képes termelni. Ezért az MA144—Ml jelű törzset Streptomyces galilaeus-ként azonosíthatjuk. 40 A találmány szerint az aklacinomicineket a S. galilaeus megfelelő körülmények között végzett tenyésztésével állítjuk elő. Az Actinomyces törzsek tenyésztésére általánosan alkalmazott eljárások megfelelőek a S. galilaeus tenyésztésére. Egy aklacinomicint tartalmazó 45 tenyészlevet úgy állítunk elő, hogy az aklacinomicint termelő mikroorganizmust megfelelő közegre oltjuk át, majd levegőztetett körülmények között tenyésztjük. Habár szilárd táptalajon végzett tenyésztéssel is előállíthatunk aklacinomicint, az antibiotikumokat nagy 50 mennyiségben süllyesztett, levegőztetett tenyészetben különösen előnyösen állíthatjuk elő. Az Actinomyces törzsek ismert fajtájú tápanyagforrásait tartalmazó táptalajok alkalmazhatók. A táptalaj előnyösen kereskedelmileg hozzáférhető termékeket tartalmazó, mint 55 amilyen például a glicerin, glükóz, keményítő, dextrin, maltóz, melasz, 'olajok, zsírok, lipoidok és hasonlóak mint szénforrást, tisztított vagy nyers formában, nitrogénforrásként pedig a kereskedelemben beszerezhető terméket, mint például szójalisztet, malátakivonatot, 60 peptont, élesztőkivonatot, melaszt, hallisztet, glutintazlet, kukoricalekvárt, gyapotmaglisztet, kazeint, hidrolizált fehérjéket, nitrátokat, ammóniumsókat, karbaraidat és hasöhlólcat. A táptalaj további alkotóelemei kálium- 65 klorid, kálium-foszfát, magnézium-szulfát, kalcium-karbonát, valamint nehéz fémek, mint például réz, mangán, vas és hasonlók sóinak nyomnyi mennyiségei. A levegőztetett, süllyesztett tenyészetben habzásgátlóként folyékony paraffint, szójaolajat, zsírt vagy szilikont használunk. A 20 C° és 35 C° közé eső tartományba eső bármely fermentációs hőmérséklet megfelelő, amelynél az aklacinomicint termelő mikroorganizmus növekedni képes, de a legelőnyösebb hőmérséklettartomány: 25 C°—30 C°. A tenyésztőközeg pH-ja 5,0 és 8,0 közé esik. Ahol másképpen nem adjuk meg, a tenyésztés és a tartalmi meghatározás módszere a következő: 1. Rázott tenyészet: egy Sakaguchi-palackba bemért 100 ml táptalajt, vagy egy 500 ml-es Erlenmeyer lombikba bemért 50 ml táptalajt 15 percig 120 C°-on sterilizálunk. Ferdeagar tenyészetről egy aklacinomicint termelő mikroorganizmus spóráit vagy micéliumát például platinakaccsal oltjuk át a sterilizált táptalajra, majd 4 napig reciprok vagy körkörös rázóasztalon 28 C°-on tenyésztjük. 2. Tanktenyészet: egy 200 literes fermentorban 100 liter táptalajt készítünk, majd 15 percig 120 C°-on sterilizáljuk. A sterilizált táptalajt 2 liter, előzőleg 2 napig rázatva tenyésztett tenyészlével oltjuk be. A tankfermentálást percenként 50 liter steril levegő bevezetése mellett, percenként 160-at forduló keverővei keverve, 2 napig végezzük. Habzásgátlóként szilikonolajat és folyékony paraffint használunk. 3. Az aklacinomicin kvantitatív meghatározása: TLC-chromatoscanner-módszer ; a tenyészléből, a micéliumról vagy a tenyészlé szűrletéből acetonnal, etil-acetáttal vagy kloroform-metanol eleggyel extrahált aklacinomicin A-t és B-t 5 mm-es átmérőjű folt formájában 5
