172133. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kondenzált kinoxalinszármazékok, mint immunszabályozó szerek előállítására
5 172133 6 ismert vegyületek, az acenafto[l,2-b]kinoxalin és a dibenzo[a,c]fenazin, minimális vagy nem szignifikáns aktivitással rendelkeznek. I. Táblázat 5 Dibenzo[a,c]fenazin-vegyületek R: Immunreakció- végpont (mg/kg) + szubsztituens(ek) visszaszorítás + orális X 9 és IV IPX2esIP jQ hidrogén 100 > 100 11-trifluor-metiT 0,8 3,1 10-trifluor-metil — 6,2 * A táblázat fejléceiben például az „IP X 2 és IP” azt 15 jelenti, hogy intraperitoneálisan 2 gyógyszerdózist adagoltunk 48 órával a juh-vörösvérsejt-antigén intraperitoneális beadása előtt és után. Az orális kezelést 9 napon át történő adagolással, az antigén intravénás adagolás előtti 3. naptól kezdődően végeztük. Az egér vérét az 20 antigén adagolása utáni 6. napon hemagglutininra (HA) vizsgáltuk. A végpontot az alacsonyabb gyógyszerdózissal határoztuk meg, mely a kontrollértékekkel összehasonlítva a HA 75%-os vagy nagyobb visszaszorítását éri el. 25 II. Táblázat R: szubsztituens(ek) Immunreakció* visszaszorítás IPX2 és IP Végpont (mg/kg)+ orális X 9 és IV 30 hidrogén — 8- trifluor-metil— 9- trifluor-metil- 6,2 >100 >100 25 * A táblázat fejléceiben például az „IP X 2 és IP” azt jelenti, hogy intraperitoneálisan 2 gyógyszerdózist adagoltunk 48 órával a juh-vörösvérsejt-antigén intraperitoneális beadása előtt és után. Az orális kezelést 9 napon át történő adagolással, az antigén intravénás adagolás előtti 3. naptól kezdődően végeztük. Az egér vérét az antigén adagolása utáni 6. napon hemagglutininra (HA) vizsgáltuk. A végpontot az alacsonyabb gyógyszerdózissal határoztuk meg, mely a kontrollértékekkel összehasonlítva a HA 75%-os vagy nagyobb visszaszorítását éri el. A vegyületeket az alábbiakban leírt módosított szérumvizsgálati eljárással teszteltük. Egyedi szérumvizsgálati eljárás Ebben a tesztben az előzőekben leírt eljárást módosítottuk úgy, hogy 10-es egércsoportokat alkalmaztunk az 5-ös csoportok helyett. Az egerektől az előbbiek szerint vért vettünk, de ezt nem gyűjtöttük össze, hanem egyenként titráltuk. Az átlagos hemagglutinin értéket (log2) ± ±S. E., mindegyik 10-es egércsoportra kiszámítottuk, és a p értéket (Student’s T teszttel) összehasonlítva a kontrollcsoporttal, meghatároztuk. A legalacsonyabb gyógyszerdózis szignifikánsan (p <0,01) csökkenti az antitest titerét, ami meghatározza a végpontot. Mindegyik esetben a gyógyszert 9 nap helyett 10 napon át adagoltuk, és ilyenkor az antigén beadása után nem a 6. napon, hanem a 7. napon vettünk vért. Az egyedi szérumvizsgálati tesztben a reprezentatív I általános képletű vegyületekkel jellemző eredményeket kaptunk, melyeket a III. táblázatban foglaltunk össze. III. Táblázat A vegyületek immunszupresszív aktivitása (egyedi szérumvizsgálati eljárás) Vegyidet Adagolási mód Dózis Vivőanyag Végpontdózis (p<0,01) mg/kg 11 -(trifluor-metil)-dibenzo[a,c]-fenazin orális 9 PEG 400* 0,4 ll-(trifluor-metil)-dibenzo[a,c]-fenazin orális 10 PEG 400 0,2 ll-(trifluor-metil)-dibenzo[a,c]-fenazin orális 9 Methocel—E* * 0,8 vagy kevesebb ll-(trifluor-metil)-dibenzo[a,c]-fenazin orális 10 Methocel—E 0,4 ll-(trifluor-metil)-dibenzo[a,c]-fenazin orális 10 kukoricaolaj 0,8 vagy kevesebb ll-(trifluor-metil)-dibenzo[a,c]-fenazin se. 10 Methocel—E 0,1 10-(trifluor-metil)-dibenzo[a,c]-fenazin orális 9 PEG 400 0,8 vagy kevesebb 9-(trifluor-metil)-acenafto[l,2-b]-kinoxalin orális 9 PEG 400 3,1 * polietilénglikol 400 * * lásd a teszt-módszer ismertetésénél Az I általános képletű vegyületek immunreakciót 60 visszaszorító hatását lépnagyobbodás csökkentésére, egereknek átültetéssel előidézett egértörzs limfoid lépsejtjeinek injekciójával teszteltük, mely módszert a gazdaszervezet transzplantáció elleni, „graft-versushost” (GVH) reakciójának nevezünk. 65 A gazdaszervezet transzplantáció elleni (GVH) reakciója Ebben a tesztben parentális (C57BL) egér lépsejtjeit F, hibrid törzs (C57 BLXC3H) egereibe injektáltuk. A recipiens egér az injektált lépsejteket nem veti ki, 3
