172133. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kondenzált kinoxalinszármazékok, mint immunszabályozó szerek előállítására
7 172133 IV. Táblázat 8 mivel a hibrid a homozigóta származású C57BL antigéneket sajátjának ismeri el. Az injektált sejtek ennek ellenére, a recipiens szövetek reakcióját váltják ki, melyet az idegen C3H-származású antigének okoznak. Ennek következtében a recipiens lépe megnagyobbodik. Az immunreakció visszaszorítása meggátolja vagy csökkenti ezt a lépnagyobbodást. így a lép súlya lehetőséget ad a GVH-reakció és csökkenésének mérésére az immunreakció visszaszorítása közben. A Simonsen-féle eredeti eljárást (Ann. N. Y. Acad. Sei. 75: 834, 1958) módosítva alkalmaztuk. A lépsejtek nagy mennyiségét kaptuk, általában a lép kézzel végzett aprítása helyett, Waring-késes-malom alkalmazásával fordított késes vágással. Kétszer 6 másodperces őrlési periódussal a lépet (25 C57BL lép 25 ml sóoldatban) eléggé elpépesítettük ahhoz, hogy a sejteket a kötőszövetektől megszabadítsuk. Az ilyen módon készített sejtszuszpenziót Levy-Hausser sejtszámlálóval 6 X 108 sejtmag/ml tartalomra standardizáltuk. 16—18 g súlyú C57BL X C3H egér ötös csoportjainak intraperitoneálisan 1 ml donorsejt-szuszpenziót injektáltunk. A kezelést, 0,2 ml szubkután adagolással, a sejtinjekció beadása előtt 3. nappal kezdtük, és 13 napon át folytattuk. A kontrollállatok csak sejtet és vivőanyagot kaptak. A sejtinjekció beadása utáni 10. napon a lépet eltávolítottuk. Az eredményeket mg lép/g testsúlyban fejeztük ki. Tekintettel arra, hogy az örökletes, vagyis a C57BL X XC3H, sejtek injekciója a recipiens egérben csak kis mértékű lépnagyobbodást hozott, ezért az ilyen állatok lépsúlyát használtuk a GVH tényező 100%-os visszaszorításaként a gátlás százalékának kiszámításában, melyet az immunreakciót visszaszorító vegyületek eredményeznek. A számítás módját az összehasonlító immunreakciót visszaszorító vegyülettel kezelt egereken a következő példával szemléltetjük : összehasonlító vegyülettel kezelés mg lép/g testsúly ±S. E.* százalékos gátlás** 12,5 mg/kg X 13 6,86 ±0,80*** 74 nem (GVH kontroll) 11,55 ±1,01 0 nem (örökletes kontroll) 5,20 ±0,37 100 nem (normál kontroll) 4,16 ±0,17 — * öt egérből álló csoport átlagértéke GVH kontroll — kezelés .--------r;-----: ------;--------,, X 100 =száza-GVH kontroll — örökletes kontroll lékos gátlás *** p =0,01, összehasonlítva a GVH kontrollal Tekintettel arra, hogy a gyakorlatban mind az örökletes, mind a normál kontroll tesztről-tesztre csak kis mértékben változik, ezért a számításhoz 20-as egércsoport egy tényező értékét (4,8) használtuk, mely négy külön örökletes kontrollcsoport (5,20 ± 0,37, 4,99 ± ±0,39, 4,42 ±0,13, 4,66 ±0,12) újraszámításából származik. A gazdaszervezet transzplantáció elleni reakciójában az I általános képletű vegyületekkel kapott eredményeket a IV. táblázatban foglaltuk össze. Vegyületek hatása a GVH reakcióban Gyógyszer Dózis mg/kgX XI3 Mg lép/g testsúly, S. E.* Százaié* kos gátlás** 1 l-(trifluor-metil)~dibenzo[a,c]fenazin 80 4,72+0,26 101,5 11 -(trifluor-metil)-dibenzo[a,c]fenazin 20 5,65 ±1,00 83,6 1 l-(trifluor-metil)-dibenzo[a,c]fenazin 5 5,68 ±0,26 83,0 9-(trifluor-metil)-acenafto[ 1,2-b]kinoxalin 80 5,00 ±0,19 96,1 9-(trifluor-metil)-acenafto[l,2-b]kínoxaIin 20 4,67 ±0,17 102,5 kontroll — 9,97 ±0,49 * 5-ös egércsoport átlagértéke GVH kontroll — kezelés , **---------------------------------------------- X 100 = száza-GVH kontroll — örökletes kontroll lékos gátlás Az immunreagálást visszaszorító képességeik alapján, az I általános képletű kinoxalin- és fenazin-vegyületek a szervtranszplantációs műtétre kerülő betegek előkezelésére használhatók. A szervtranszplantációs operációkra való alkalmazásukon túlmenően, ezek az immunszabályozó szerek különböző, kevéssé ismert kóreredetű betegségekben is alkalmazhatók, melyeket általában „autoimmun” betegségeknek neveznek. Ilyen betegségek: az autoimmun Crosby-szindróma, idiopatikus trombocitopéniás bőrvérzés, lupusz eritéma, lupoid hepatitisz, lupuszos vesegyulladás, glomerulonefritisz, nefrotikus szindróma, Goodpasture-szindróma, Wegener-granulóma, szkleroderma, Sezary-betegség, pszoriazis, uveitisz, reumás ízületi gyulladás, vastagbél-fekély pajzsmirigy-gyulladás és a mumpsz. Autoimmun reagálást visszaszorító szerek, mint az azatiapren, általában többé-kevésbé olyan mértékben alkalmasak az előbbi betegségek kezelésére, mint amennyire ezek a betegségek az autoimmun mechanizmustól függenek. Az új kinoxalin- és fenazin-vegyületek adagolási módja magába foglalja az orális és szubkután adagolást. Orális adagoláshoz az immunszuppresszív szer polietilénglikolban oldható vagy szuszpendálható. Vizes vivőanyag, melyhez felületaktív szer is adható, szintén alkalmas. Szubkután injekcióhoz izotóniás sóoldat használható. Az immunszuppresszív szert a különböző vivőanyag 1—200 mg/ml arányban tartalmazza. A következő példák a találmány szerinti eljárás további szelméltetésére, az I általános képletű vegyületek és intermedierjeinek előállítására szolgálnak. 1. példa 20,6 g (0,1 mól) 4-amino-3-nitro-benzotrifluoridot szobahőmérsékleten, 100 ml vízmentes etanolban, 1,5 g 5%-os palládium-csontszénnel, 3,44 at nyomáson hidrogénezünk. A reakcióelegy 3 ekvivalens hidrogént abszorbeál, és a hőmérséklet 70 °C-ra emelkedik. A hidro-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
