171837. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1alfa-hidroxi-szteroidok előállítására
3 171837 4 zetétől és a mikroorganizmustól függ, elkülönítése ismert módon végezhető. A találmány szerinti termékeket önmagában ismert módon izoláljuk és tisztítjuk. így például a termékeket szerves oldószerrel, mint metil-izobutil-ketonnal extraháljuk, a kivonatokat bepároljuk és a találmány szerinti termékeket oszlopkromatográfiával szétválasztjuk és tisztítjuk. A szabad hidroxilcsoportok adott esetben utólagosan elvégzett észterezése a szteroid-kémiában szekunder és tercier hidroxilcsoportok észteresítésére alkalmas eljárás, például a szteroidok savanhidridekkel vagy savkloridokkal bázikus katalizátorok — mint nátrium-hidrogén-karbonát, kálium-hidrogén-karbonát, kálium-karbonát, nátrium-hidroxid, kálium-hidroxid, piridin, lutidin, kollidin vagy 4-dimetil-amino-piridin — jelenlétében végzett reagáltatásával történik. Az I általános képletű új vegyületek farmakológiailag értékes vegyületek, hatásspektrumuk hasonló az előállításukra kiindulóanyagként alkalmazott 1-helyzetben nem hidroxilezett szteroidokéhoz. Például a 17a-etinil-la,17ß-dihidroxi-18-metil-4-ösztren-3-ont (1) jóval erősebb gesztagén hatást mutat, mint az 1-helyzetben nem hidroxilezett 17<x-etinil-17 ß-hidroxi-18-metil-4-ösztren-3-on (2). /. táblázat Clauberg-teszt* kasztrált infantilis nőstény nyulakon vizsgálva Dózis mg McPhail-érték** p.o. 1 2 0,3 2,8 2,4 0,1 3,1 1,1 0,03 1,8 1,0 * [C. Clauberg, Zentralblatt für Gynäkologie, 54, (1930) 2757] és [M. K. McPhail, J. Physiol. (London) 83, (1934), 10 és 145]. ** Az endometrium progesztacionális átalakulását a hisztológiai készítményekben módosított McPhail skála szerint értékeltük (a skála 1—4, 1: nincs hatás, 4: teljes átalakulás). Mint az alábbi II. táblázatból kitűnik, a találmány szerinti (I) jelzésű 17a-etinil-la,17ß-dihidroxi-18-metil-4-ösztren-3-on 3 mg-os mennyisége kisebb androgen hatással rendelkezik, mint az 1-helyzetben nem hidroxilezett, II jelzésű 17<x-etinil-17ß-hidroxi-18-metil-4-ösztren-3-on 1 mg-nyi mennyisége. II. táblázat Anabol/androgén-teszt* kasztrált hímpatkányokon vizsgálva Vegyület jelzése Dózis mg-ban s. c. Ondóhólyag Prosztata Levator ani Dózis mg-ban s. c. mg/100 g testsúlyban i ii 3 1 80 136 97 108 52 49 * [L. Hersbeeger és szerzőtársai, Proc. Soc. exp. Biol. Med. 83 (1953) 175]. Mint a fenti adatokból kitűnik, az 1-helyzetben nem hidroxilezett vegyületekkel összehasonlítva, az új vegyületek androgen mellékhatása jelentősen kisebb. Ezen túlmenően a találmány szerinti vegyületek ösztrogén hatásúak. Az említett előnyös tulajdonságok következtében az új vegyületek értékes hatóanyagok. A gyógyászati felhasználás céljaira az új vegyületeket a galénuszi gyógyszerészetben szokásos adalékokkal, hordozóanyagokkal és ízjavító szerekkel együtt, önmagában ismert módon gyógyszerkészítményekké dolgozzuk fel. Orális adagolás számára főleg tabletták, drazsék, kapszulák, pilulák, szuszpenziók vagy oldatok jönnek tekintetbe, parenterális alkalmazáshoz pedig különösen olajos oldatok, mint például szezámolajos vagy ricinusolajos oldatok, melyek adott esetben még hígítószert, mint például benzil-benzoátot vagy benzil-alkoholt is tartalmazhatnak. Az így összeállított gyógyszerkészítményekben a hatóanyagok koncentrációja az alkalmazási formától függ. A találmány szerint új vegyületeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerek fogamzásgátló szerekként, ciklus-rendellenességek kezelésére és menopauza-készítményekként használhatók. Az új gesztagének természetesen ismert ösztrogénekkel kombinálva is alkalmazhatók. A következő kiviteli példák a találmány szerinti eljárás megvilágítására szolgálnak. 1. példa 30 3% glükózból, 1,0% kukoricalekvárból, 0,2% NaN03 -ból, 0,1% KH 2 P0 4 -ból, 0,05% MgS0 4 -ból, 0,2% K2 HP0 4 -ből, 0,002% FeS0 4 -ból és 0,05% KC1-ból álló, autoklávban 120 °C-on sterilezett, 500 ml táp-35 oldatot tartalmazó 2 literes Erlenmeyer-lombikot Aspergillus clavatus (ATCC 9598) liofilizált kultúrájával beoltunk és 2 napig 30 °C-on rotációs rázógépben rázatjuk. Ezzel az előtenyészettel oltjuk be az 50 literes fermentort, amely az előtenyészettel azonos összetételű, 1,1 atü 40 nyomáson 121 °C-on sterilezett 30 liter tápoldatot tartalmaz. Silicon SH habzásgátlót hozzáadva 29 °C-on, levegőztetés és keverés közben tenyésztünk. A tenyészlé 900 ml-ét steril körülmények között a fen-45 tiek szerint sterilezett, azonos összetételű 14 liter tápközegbe visszük át és a tenyésztést hasonló körülmények között folytatjuk. 24 óra múlva vizes Tween 80 jelenlétében 7,5 g 17<x-etinil-17 ß-hidroxi-18-metil-4-ösztren-3-on desztillált vízzel készült, finom eloszlású, steril 50 szuszpenzióját adjuk hozzá és tovább tenyésztjük. A fermentorból vett próbák metil-izobutil-ketonos kivonatának rétegkromatográfiás elemzésével követjük az átalakulást. Mintegy 90 óra kontaktidő után az átalakulás teljes. A gombamicéliumot leszűrjük és a tenyé-55 szét szűrletét 2 X 10 liter metil-izobutil-ketonnal extraháljuk. Ezzel párhuzamosan a leszűrt micéliumot metil-izobutil-keton(aceton)víz eleggyel keverve többször extraháljuk. A szerves kivonatokat egyesítjük és vákuumban, 60 50 °C fürdőhőmérsékleten szárazra pároljuk. A maradékot hexánnal többször mossuk, majd szilikagél-oszlopon kromatografáljuk. További tisztítás céljából a terméket (5,4 g) metilén-klorid/benzol elegyből kristályosítjuk, majd a benzol eltávolítása céljából a benzol-szolvátot 65 etanol/víz elegyből még egyszer átkristályosítjuk. A tisz-10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
