171783. lajstromszámú szabadalom • Eljárás csíraszegény, szálmentes pankreatin előállítására

171783 6 A csíraszámcsökkentéssel egybekötött zsírtalanítást rövid időn át magasabb hőmérsékleten (mintegy 30— 60 C°-on) végezzük. Számottevő enzimkárosodás ilyen körülmények között nem lép fel. Az eljárást előnyösen centrifugális extraktorban ellenáramú extrakcióval vé- 5 gezhetjük el. Az extrakciós idő 60 C°-os felső hőmérsékleten 30—30 mp. A találmány szerinti eljárás ezen lépésében klórozott szénhidrogének és fluorozott-klórozott szénhidrogének elegyét alkalmazzuk. A fenti oldószerelegyek alkalmazása jó zsírtalanítás és megfelelő csíra- 10 számcsökkenés mellett a magas hőmérséklet ellenére is megakadályozza az enzimaktivitás csökkentését. A hasnyálmirigy és halogénezett oldószerelegy súlyaránya tág határokon belül változhat és kb. 1: 2 és 1: 50 közötti érték. 15 Oldószerként 20—150 C° forráspontú klórozott szénhidrogéneket (előnyösen diklórmetánt és triklórmetánt) és 20—150 C° hőmérsékleten forró fluorozott-klórozott szénhidrogéneket (előnyösen triklórfluormetánt és triklórtrifluoretánt) alkalmazhatunk. Az oldószerelegyben 20 a klórozott szénhidrogének és a fluorozott-klórozott szénhidrogének súlyaránya előnyösen kb. 1: 0,05 és 1: 2 közötti érték. Az enzimfázis betöményítését vákuumban alacsony hőmérsékleten végezzük. A betöményítést gyorsbepárlóban, legfeljebb 5 mp-es tartózkodási idővel, 60 C°-nál nem magasabb termék-hőmérséklet mellett ajánlatos elvégezni. A fenti értékek túllépésekor aktivitás-veszteség lép fel. A Pankreatin szárítását kíméletes körülmények kö- 30 zött, ismert szárítási eljárásokkal (fagyasztva szárítás, vákuum-szárítás, porlasztva szárítás) hajtjuk végre. A találmány szerinti eljárás további előnye, hogy kíméletes szárítás után viszonylag nagy térfogatsúlyú 35 — kb. 500—700 g/l — és nagyon finom-részecskéjű — átlagos részecskeátmérő kb. 30—50 \xm — pankreatint kapunk. E két tulajdonság együttes fellépése következtében a Pankreatin gyógyászati felhasználásánál kis térfogatban 40 nagy dózis vihető be; egyidejűleg a finom részecskenagyság következtében az enzim az emésztőtraktusban gyorsabban szabadul fel. A hasnyálmirigy ismert feldolgozási eljárásai során általában lényegesen kisebb térfogatsúlyú terméket kap- 45 tak (kb. 300—400 g/l). A térfogatsúly növelése csak további granulálási és tömörítő műveletekkel lehetséges. Nagyobb térfogatsúly továbbá a pankreatinnak extraktumokból sókkal történő kicsapásával is elérhető; az ily módon biztosított nagyobb térfogatsúly esetén 50 azonban a pankreatinba a lecsapószerből szennyezések kerülnek be. A találmány szerinti eljárással előállított termék szálmentes ; ezzel szemben az ismert módszerekkel készített termékek gyakran nagymennyiségű szálat tartalmaznak. 55 A nem-szálmentes terméket ballasztanyagok kísérik és így a végtermék súlyegységre vonatkoztatott enzimaktivitása kisebb. Az ilyen termékekből az enzim lassabban szabadul fel. A tabletták és drazsék készítését a szálak jelenléte megnehezíti, ezenkívül a termék a szálak jelen- 60 léte következtében repedésképződésre hajlamos. A találmány szerinti eljárásnál a terméket az aprítástól egészen a szárításig szabadonfolyó állapotban tartjuk. A magasabb hőmérsékleten elvégzett eljárás-lépések után a terméket nagyon gyorsan olyan hőmérsékletre 65 hűtjük, melyen enzimkárosodás nem lép fel. A terméket előnyösen kb. 1—8 C°-rä hűtjük. A találmány szerinti eljárás további előnye, hogy a csíraszámot csökkentő lépés (zsírtalanítás) utáni berendezések és műveletek mikrobás fertőzésekkel szemben védettek. A találmány tárgyát képező eljárás különös előnye, hogy a hasnyálmirigy feldolgozásánál a zsírtalanítás és csírátlanítás az enzimaktivitás csökkenése nélkül egyetlen munkamenetben elvégezhető. A Pankreatin kinyerésére egyetlen olyan eljárás sem ismeretes, melynél az összcsíraszámot csökkentik és az USP XVIII szerint nem kívánatos csírákat teljesen kiküszöbölik. Az egyetlen ismert eljárásnál a Pankreatin kiindulási anyagát — azaz a hasnyálmirigyet — kezelik szalmonellák elpusztítása céljából hipoklorit-oldattal; ekkor azonban az enzimaktivitás jelentős mértékben csökken. Eljárásunk során az alábbi nem kívánatos csírákat küszöböljük ki: Salmonellák, Escherichia coli, Staphylococcusok, Pseudomonas aeruginosa. A találmány további részleteit a példákban ismertetjük anélkül, hogy a találmányt a példákra korlátoznánk. 25 1. példa Folyamatosan működő berendezésben óránként 25 kg mélyhűtött hasnyálmirigyet [ — 20 C°] több lépésben finoman elporítunk. A képződő pépet [0 C°] folyamatos keverő berendezésben óránként 6 kg 20 C°-os vízzel elegyítjük és a kapott elegyből a zsírt centrifugális extraktorban ellenáramban diklórmetán és triklórfluormetán elegye vei (150 kg diklórmetán és 50 kg triklórfluormetán óránként) 60 mp-en át extraháljuk. Az enzimes fázis 50 C°-ig terjedő hőmérsékletre felmelegszik. A zsír-oldószer fázisból az oldószerelegyet újra-desztillációval folyamatosan visszanyerjük és az eljárásba visszavezetjük. A zsírtalanított enzimfázist hőcserélőben 5 C°-ra hűtjük, majd gyorsbepárlóban 40 C°-on (150 Hgmm) kb. 25% szárazanyag-tartalomra bepároljuk. A termék a fűtőközeggel kb. 1 mp-ig érintkezik. A kapott koncentrátumot hőcserélőben 5 C°-ra lehűtjük, majd porlasztásos szárítón szűrt levegővel szárítjuk. A pankreatin-kitermelés kb. 5 kg/óra. A kapott termék az alábbi tulajdonságokkal rendelkezik: Amiláz-aktivitás 42 000* FIP-egység/1 gramm Lipáz-aktivitás 58 000* FIP-egység/1 gramm Proteáz-aktivitás 2 800* FIP-egység/1 gramm Víztartalom 2,0 % Zsírtartalom 0,6% Térfogatsúly 510 g/l 1 Részecskenagyság 30—50 fim 80% 10—30 [j.m 10% 10 [Am-nál kisebb 10% Csíraszám 2 X 103 csíra/l g * Meghatározás a Federation Internationale Pharmaceutique előírásai szerint (Hennrich, Bestimmung von Pankreatin: Pharm. Ind. 31 (1969) 228.] Csíradifferenciálás: A végtermékben csupán a kiindulási anyagban előforduló apatogén spóraképzők találhatók. Az USP XVIII szerint nem-kívánatos csírák a végtermékben nem mutathatók ki. 3