171783. lajstromszámú szabadalom • Eljárás csíraszegény, szálmentes pankreatin előállítására

3 171783 4 lecsapásánál széntetrakloridot és triklóretilént alkalmaznak szakaszos munkamenetben. Ullmann: Encyklopedie der technischen Chemie című művének 397. oldalán Pankreatin készítmények igen körülményes előállítási eljárását ismertetik, melynek során aprított hasnyálmirigyet kevés kloroformot tartalmazó vízzel 25 órán át extrahálnak, majd a kipréselt folyadékból a fermenteket alkohollal vagy acetonnal kicsapják, elválasztják, mossák, majd szárítják. A 3 260 654 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban foglaltak szerint hasnyálmirigyet valamely konzerválószer (pl. kloroform) jelenlétében történő autolízissel aktiválnak; az eljárás során a lipáz és amiláz aktivitás azonban teljesen tönkremegy. A 2 503 313 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás értelmében hasnyálmirigy víztelenítését és zsírtalanítását vízzel nem elegyedő, vízzel 60 C°-nál alacsonyabb forráspontú azeotropot képező zsír-oldószerrel (etiléndiklorid) történő kezeléssel, majd az azeotrop ledesztillálásával, a zsírtartalmú oldatnak a szárított szilárd anyagtól történő elválasztásával, majd az oldószer 70 C°-nál alacsonyabb hőmérsékleten történő ledesztillálásával végzik el — az etiléndiklorid azonban csupán a víznek a mirigyből történő eltávolítására szolgál. A 3 223 594 sz. amerikai egyesült államok-beli szabadalmi leírás acetonnal kicsapott vizes extraktum szálmentesítésére vonatkozik. A 3 168 148 sz. amerikai egyesült államok-beli szabadalmi leírás egy lipolitikus enzim kinyerését ismerteti. A 928.654 sz. brit szabadalmi leírás szerint pankreatint a vizes extraktumból acetonos kicsapással és a szálak eltávolításával állítanak elő. A fenti irodalmi helyeken csírátlanítást, vagy a csíraszám csökkentését azonban meg sem említették. A C. A. 75, 101.214b (1971) irodalmi helyen proteáznak, amiláznak és lipáznak vizes hasnyálmirigy-extraktból történő lecsapásához az aceton-koncentráció optimalizálását tárgyalják. A C. A. 75, 101.215c (1971) közleményben leírt eljárás szerint hasnyálmirigyből az enzimeket vízzel 36 órán át történő extrakcióval nyerik ki. Több munka foglalkozik a Pankreatin csíraszámának csökkentésével. így pl. B. Schlatter „Dissertation ETH Zürich, 1971; Pharm. Acta Helvetiae 49 (1974), 41" közleménye szerint pankreatint izopropanollal és vízzel vagy gamma-sugarakkal kezelnek, vagy e két kezelést egyidejűleg végzik el. Az izopropanolos-vizes kezelés után az oldószer-elegyet azeotrop desztillációval eltávolítják. A 147—274 sz. csehszlovák szabadalmi leírás értelmében pankreatint a csíraszám csökkentése céljából szintén gamma-sugarakkal kezelnek. Más módszer értelmében a csíraszámot etilénoxidos kezeléssel csökkentik. [Libicky A., et al.: Die Pharmazie, 22 (1967), 311 és 23 (1968), 21.] A 2 135 025 sz. német szövetségi köztársaságbeli nyilvánosságrahozatali irat szerint Pankreatin csíraszámának csökkentését 15—100 C° forráspontú halogénezett szénhidrogénekkel, illetve alifás ketonokkal víz és cellulóz-származékok jelenlétében történő kezeléssel végzik el. Halogénezett szénhidrogénként azonban kizárólag klórozott szénhidrogéneket, éspedig metilénkloridot és kloroformot jelölnek meg. A kapott szabadonfolyó pankreatin-granulátum 100 g-ként szalmonelláktól mentes, míg 1 g-ként enterobaktériumoktól és pszeudomonászoktól mentes, 104 értéknél kisebb összcsíraszám mellett. A 2 106 706 sz. német szövetségi köztársaságbeli nyilvánosságrahozatali irat (ill. a megfelelő 1 274 604 sz. brit szabadalmi leírás) szerint a szalmonellák elpusztítása céljából kalciumvegyületekkel elegyített pankreatint 5 82 C°-on több órán át normál nyomáson melegítik. A fenti eljárásnál a csíraszám csökkentése céljából a pankreatint kiindulási anyagként alkalmazzák. Más ismert eljárás során a szalmonellák elpusztításánál kiindulási anyagként hasnyálmirigyet alkalmaznak [E. J. 10 G. Glencross: Brit. Med. Journal 2 (1972), 376]. Az eljárás során hasnyálmirigyet vizes hipoklorit-oldattal kezelnek, megőrlik, vákuumban szárítják és zsírtalanítják. Az 558 814 sz. svájci szabadalmi leírás szerint pankre-15 átint izopropanol—víz eleggyel kezelnek és ily módon a csíraszámot csökkentik. Az eljáráshoz azonban hasnyálmirigyből extrakcióval korábban kinyert pankreatint alkalmaznak. Az eljárás a hasnyálmirigy zsírtalanításából, extrakciójából, majd az ily módon kinyert pankrea-20 tin csíraszám-csökkentéséből áll, tehát két lépéssel többet tartalmaz a találmány tárgyát képező eljárásnál, melynek segítségével hasnyálmirigyből közvetlenül csíramentes terméket kapunk. A csíraszám csökkentésére szolgáló valamennyi fent 25 ismertetett eljárás nagyon körülményes és ezenkívül részben az aktivitás nagyon jelentős csökkentéséhez vezet. A találmány tárgya eljárás nagy amilolitikus, lipolitikus és proteolitikus aktivitással rendelkező csíraszegény 30 szálmentes Pankreatin előállítására azzal jellemezve, hogy fagyasztott, finoman aprított hasnyálmirigyet — adott esetben víz hozzáadása után — folyékony klórozott szénhidrogének és folyékony fluorozott-klórozott szénhidrogének elegyével folyamatos munkamenetben 35 rövid ideig zsírtalanítunk és csírátlanítunk, majd a zsíroldószer fázis elválasztása után az enzim fázist betöményítjük és szárítjuk. Meglepő módon azt találtuk, hogy a zsírtalanítás alatt a csíraszám nagy mértékben csökken és a USP XVIII 40 (The United States Pharmacopeia, 18. átdolgozás) szerint nem-kívánatos csírák teljes mértékben elpusztulnak. Meglepő továbbá, hogy végtermékként nagy térfogatsúlyú szálmentes pankreatint kapunk. A folyamatos eljárás továbbá lehetővé teszi a hasnyál-45 mirigy kíméletes körülmények között nagyon rövid idő alatt történő feldolgozását. A szabadonfolyó tulajdonságai révén galenikusan könnyen feldolgozható világos végtermék magas enzimaktivitással rendelkezik, mely egyrészről az újfajta 50 folyamatos feldolgozásra, másrészről a zsírtalanításnál alkalmazott fluorozott-klórozott szénhidrogének jelenlétére vezethető vissza. A találmány szerinti eljárásnál a mirigy anyagát a sejtszerkezet megszüntetéséig finoman megőröljük. Ezáltal 55 a klórozott szénhidrogén és fluorozott-klórozott szénhidrogén elegyével történő kezelésnél rövid idő alatt nagyhatásfokú zsírtalanítás érhető el. Ezenkívül az őrlés következtében gyakorlatilag szálmentes anyag keletkezik és ezáltal a Pankreatin enzim veszteséggel járó 60 további őrlése kiküszöbölhető. Az aprításnál fontos, hogy a terméket alacsony hőmérsékleten tartsuk. Az aprított anyaghoz vizet adhatunk, adott esetben a halogénezett oldószer-eleggyel együtt. A hasnyálmirigy és víz súlyaránya tág határokon belül változhat 65 és pl. 1: 0 és 1: 10 közötti érték lehet. 2