171719. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antibiotikum előállítáásra
1117 LS-mindig hatékony, hatása azonban a kiindulási antibiotikuménál gyengébb. (6) A találmány szerinti antibiotikum semleges anyag, amely az elektroforézisnél nem vándorol. Ha az anyagot savasán hidrolizáljuk (például 10 s%-os kénsavval 80 °C-on), redukáló cukrok hasadnak le. Ezáltal lehetővé válik, hogy a vékonyréteg-kromatográfiánál az antibiotikumot kovagél-lemezen savas cukorreagensekkel, például ánizsaldehiddal és kénsavval, vagy benzidinnel és triklórecetsavval, vagy timollal és kénsavval láthatóvá tegyük. Ha a lejnezt 10/^-os kénsavval bepermetezzük, majd 80 °C-ra melegítjük (10 percig), szintén kékesszürke színeződést kapunk. Ezt a módszert már javasolták, mint jellegzetes reakciót makrolid antibiotikumok kimutatására (E. Stahl: Dünnschichtchromatographie, 2. kiadás, (1967) 546. old.). A találmány szerinti antibiotikum R.-értékeit kpvasavgél-lemezen (Merck, Darmstadt, NSZK) különböző futtatóelegyekkel az 1. táblázat mutatja. 1. táblázat Futtató elegy (tf.-részek) R, metanol + kloroform 5 + 95 0,025 20 + 80 0,49 5Q + 50 Q,755 100 + 0 0,715 n-butanol + jégecet + víz 60 + 20 +20 0,470 A találmány szerinti antibiotikumnak a már ismert antibiotikumoktól való megkülönböztetésekor az aromás felépítésű, nitrogéntartalmú és kloroformban nem oldódó antibiotikumokat figyelmen kívül hagyhatjuk, mert a találmány szerinti antibiotikum szénből, hidrogénből és oxigénből áU, nitrogént nem tartalmaz. A hidrolízissel lehasítható redukáló cukrok, az oldhatóság és a 10%-os kénsavval elérhető festhetőség arra mutat, hpgy az új antibiotikum bizonyos mértékben a makrpljjd antibiotikumokhoz hasonlít, amelyek közül néhány nitrogépmentes képviselő is ismert. A találmány szerinti antibiotikummal szemben a makrolid antibiotikumok azonban főleg Gram-pozitív mikroorganizmusok ellen hatékonyak, nem Gram-negatívekkel szemben [Keller—Schierlein, Fortschritte der Chemie organischer Naturstoffe 30, 314. old. (1973)]. Továbbá 267 nmnél adszorbeáló makrolid-antibiotikum eddig nem vált ismertté (Gottlieb, Shaw, Antibiotics II (1967) 159. pld.). Meglepő módon a fenti Actinoplanes-törzsek termelik az új antibiotikumot, amelyet jó hozammal izolálhatunk a közegből. Meglepő továbbá, hogy a találmány szerinti antibiotikum erős mikroba-ellenes, főleg baktériumellenes és ezen belül Gram-negatív kórokozók elleni hatást mutat anélkül, hogy az ismert antibiotikumok fent említett hátrányait mutatná. Az új antibiotikumnak továbbá az a meglepő tulajdonsága van, hogy állatoknál a növekedést gyorsítja és a takarmány kihasználását fokozza- A találmány szerinti antibiotikum tehát a gyógyászatot és a technikát gazdagítja. A találmány szerinti eljárásban a CBS 432.74 és CBS 434,74 jelű új Actinoplanes-törzseket alkalmazzuk. A találmány szerinti eljárásban alkalmazható CBS 432.74 és CBS 434.74 jelű Actmoplanes törzsek a Schizomycetes osztályhoz, az Actinomycetales rendhez, az Actinoplanacea családhoz és az Actinoplanes fajhoz tartoznak. A CBS 432.74 számú törzset talajból izoláltuk. A CBS 434.74 törzs a CBS 432.74 számú törzs spontán 5 mutációjának az eredménye. Mindkét törzsre az alábbiak jellemzők: A micélium 0,3—1,3 ;x szeles és elágazott. A spóratokok szabálytalan alakúak, körvonaluk megközelítőleg gömb alakú, felületük azqnljan púpos; átmérőjük 5— 10 18 [A. A spórák gömb alakúak vagy ellipszoidálisak, ostqrt hprdanak. A spórák gyors mozgásúak, átmérőjük 0,7—4,3 u-; a spórátokban hullámos, göndörödött láncok alakjában helyezkednek el. Különböző táptalajokon tenyésztve (20—30 °C-on) 15 14 nap elteltével az alábbi jellegzetességeket figyelhetjük meg. Czapek-agar növekedés jó, illetve igen jó szubsztrát-mieélium narancsszínű 20 oldható pigment enyhén barnás-sárga spóratok + ; micélium felület yéjcpnyan harmatos. CPC (Casa- növekedés jó, illetve igen jó mipo-Pepton^ szubsztrát-mieélium na rancsszínO-na-25 Czapek-agar) rancsbarna oldható pigment: barna spóratok +-)-, micélium felület vékonyan harmatos. Tej-agar növekedés jó, illetve igen jó 30 szubsztrát-mieélium: narancsszínű oldható pigment: aranybarna spóratokok: ++ ; micélium felület vékonyan harmatos, kazein peptonizálva. 35 Tirozin-agar növekedés közepes, néha jó szubsztrát-mieélium: barna oldható pigment- barna spóratokok: — ; mißelium-feUjlei részben vékonyan harmatos; a tiro^in-40 kristályok nem oldódnak. Melanin-képzodés: pozitív a tej peptonizálása: pozitív Jelmagyarázat: 45 + sok spórátok + + igen sok spórátok — spóratok nincs A CBS 434.74 számú törzs abban különbözik a CBS 432.74 számú törzstől, hogy az előbbi antibiotikumot 50 termel. A találmány szerinti eljárásban szilárd, félig szilárd vagy folyékony tápközegeket alkalmazhatunk. Előnyösen vizes, folyékony tápközegeket használunk. A tápközegeket általánosan ismert módszerek szerint 55 oltjuk be, például ferde csövektől vagy lombik kultúráktól kiindulva. A mikroorganizmusokat aerób körülmények között tenyésztjük, amikor is a szokásos módszerekkel, így rázólombikkal, levegővel átáramoltatott kultúrákkal vagy 60 süllyesztett kultúrákkal dolgozunk. Előnyösen levegőztetett fermentorokban, az aerób süllyesztett eljárás szerint tenyésztjük a kultúrát, például a szokásos fermentáló tankokban. A tenyésztést szakaszosan vagy folyamatosan végezhetjük. Előnyös a szakaszos üzemmód. 65 A tenyésztéshez minden, az Actinomycetales rendhez 2
