171718. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antibiotikum előállítáásra

9 171718 10 dául az alkalmazott tápközeg eredeti térfogatára bepároljuk. Adott esetben bázissal, előnyösen nátriumhidroxiddal 7 feletti pH értéket, például 9-et állítunk be. Az így kapott oldatot a továbbiakban „I. oldat"-nak nevezzük. Az I. oldatból az antibiotikumot extrakcióval, kicsapással vagy kromatográfiai úton izoláljuk, majd adott esetben tisztítjuk. Kromatográfiai módszerként az oszlopkromatográfiát vagy a preparatív vékonyréteg-kromatográfiát alkalmazzuk. Adszorbensként minden nem-savas szervetlen vagy szerves adszorbenst használhatunk, például alumíniumoxidot, kovasavgélt, magnéziumszilikátot, aktívszenet, cellulózt, cellulóz-származékokat, térhálósított dextrán-származékokat, műgyantákat, így poliamidokat, poliamid-származékokat, például acetilezett poliamidot stb. Preparatív vékonyrétegkromatográfia esetén futtató elegyként a legkülönbözőbb oldószereket és oldószer-elegyeket alkalmazhatjuk, amelyekben a találmány szerinti antibiotikum oldható. Előnyösen kloroform és metanol például 5: 1 arányban készített elegyét alkalmazzuk. Az oszlopkromatográfiai feldolgozás során szintén olyan oldószereket, illetve oldószer-elegyeket alkalmazhatunk, amelyekben az antibiotikum oldható. Az oldószerek példáiként a metilénkloridot és előnyösen a kloroformot nevezzük meg. A találmány szerinti antibiotikumot előnyösen extrakciós eljárásokkal, adott esetben kromatográfiai módszerekkel és kicsapásos módszerekkel kombinálva izoláljuk. Attól függően, hogy az antibiotikumot a vizes vagy a szerves fázisba akarjuk átvinni, olyan oldószert választunk, amelyben az antibiotikum nehezen, illetve könynyen oldódik. Az extrakciót például az alábbiak szerint végezhetjük. Az I. oldatot vízzel nem elegyedő szerves oldószerekkel szokásos módszerek segítségével (kirázás, ellenáramú extrakció stb.) extraháljuk. Oldószerként a szokásos extraháló szerek, például észterek, így etilacetát, butilacetát, hosszabb szénláncú alkoholok, így amilalkoholok (pl. n-amilalkohol), vízzel nem elegyedő ketonok, például metilizobutilketon, klórozott rövidszénláncú szénhidrogének, például kloroform, metilénklorid jönnek szóba. Előnyösen etilacetátot vagy butilacetátot, különösen előnyösen etilacetátot alkalmazunk. Ha az I. oldat extrakcióját etilacetáttal (és/vagy butilacetáttal) végezzük, a vizes fázist kiontjuk, tekintettel arra, hogy az antibiotikum a szerves fázisban van. A szerves fázist betöményítjük, például eredeti térfogatának egytizedére vagy egyharmincadára, majd az antibiotikumot kicsapó oldószer hozzáadásával kicsapjuk. Kicsapó oldószerként olyan oldószert használunk, amelyben az antibiotikum nehezen oldódik. Ilyen oldószerek például a dietiléter, telített egyenes- vagy elágazó szénláncú vagy ciklusos szénhidrogének, így petroléter, n-hexán vagy ciklohexán. A nyers antibiotikumot vagy folyékony-folyékony megoszlatással (pl. Craig-féle módszerrel), vagy kívánt esetben kromatográfiai úton (oszlop- vagy vékonyrétegkromatográfia) segítségével tovább tisztíthatjuk, amikor is adszorbensként a szokásos nem-savas szervetlen és szerves adszorbenseket alkalmazhatjuk, így például alumíniumoxidot, kovasavgélt, magnéziumszilikátot, aktívszenet, cellulózt, cellulóz-származékokat, műgyantákat, így poliamidok és azok származékait, például acetilezett poliamidot, dextrángéleket, ioncserélő gyantákat. Ha az I. oldatot nem etilacetáttal vagy butilacetáttal, hanem másmilyen oldószerrel, például n-butanollal extraháljuk, a vizes fázist kiontjuk, mert az antibiotikum a szerves fázisban van. A szerves fázist az eredeti térfogatának például 1/10—1/30 részére betöményítjük, és 5 hozzáadunk valamilyen alkalmas szerves kicsapószert, például olyan oldószert, amelyben az antibiotikum nehezen oldódik. Ilyen oldószerek például a dietiléter, telített egyenes vagy elágazó szénláncú vagy ciklusos szénhidrogének, így petroléter, n-hexán és ciklohexán. A ka-10 pott csapadékot vízben feloldjuk és az oldatot fagyasztva szárítjuk. A kapott nyers terméket adott esetben etilacetáttal, extraháljuk, amikor is a nemkívánatos kísérő anyagok nem oldódnak és az oldat antibiotikumban feldúsul. Az oldatot folyékony-folyékony megoszlatással 15 vagy kromatográfiai úton feldolgozzuk. A tisztítást úgy is végezhetjük, hogy a nyers terméket szerves oldószerben, például széntetrakloridban, kloroformban vagy metilénkloridban oldjuk, majd olyan oldószert adunk az oldathoz, amelyben a találmány szerinti antibiotikum 20 nem oldódik. Ilyen oldószer például a dietiléter, telített egyenes vagy elágazó szénláncú vagy ciklusos szénhidrogének, például petroléter, n-hexán és ciklohexán. Oldataiból az antibiotikumot a szokásos módszerek, például az oldószer elpárologtatása, fagyasztva szárítás 25 stb. útján nyerhetjük ki. Az új Actinoplanes-törzseket az alábbi intézményeknél helyeztük letétbe: a) CBS 432.74 ATCC 31058 sz. alatt 1974. VIII. 2-án. 30 CBS 432.74 sz. alatt 1974. VIII. 12-én. FRJ 2669 sz. alatt 1974. VIII. 9-én. b) CBS 434.74 ATCC 31060 sz. alatt 1974. VIII. 2-án. CBS 434.74 sz. alatt 1974. VIII. 12-én. 35 FRJ 2671 sz. alatt 1974. VIII. 9-én. ATCC = American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockeville, Maryland 20852 USA CBS = Centralbureau voor Schimmelcultures, Baarn, 40 Niederlande FRJ = Fermentation Research Institute, Tokyo, Japán. Az antibiotikumot a szokásos gyógyászati készítmé-45 nyekké alakíthatjuk. A készítmények a hatóanyagon kívül közömbös hordozó- és vivőanyagokat tartalmaznak. A találmány szerint előállítható antibiotikumot előnyösen adagolási egységek alakjában szerelhetjük ki, 50 ami azt jelenti, hogy a készítmény egységei, azaz tabletták, drazsék, kapszulák, pirulák, kúpok vagy ampullák az egyszeri dózis tört részét vagy sokszorosát tartalmazzák. Az adagolási egységek például 1,2, 3 vagy 4 egyszeri dózist, vagy az egyszeri dózis felét, egyharmadát 55 vagy egynegyedét tartalmazhatják. Az egyszeri dózis előnyösen az egyszerre adható dózisnak felel meg, ami általában a napi dózis, annak fele, egyharmada vagy egynegyede. Nemtoxikus, közömbös, gyógyászatilag alkalmas hor-60 dozóanyagon itt mindenféle szilárd, félig szilárd vagy folyékony hígítószer, töltőanyag vagy segédanyag értendő. Az előnyben részesített gyógyászati készítmények példáiként az alábbiakat nevezzük meg: tabletták, drazsék, 65 kapszulák, pirulák, szemcsék, kúpok, oldatok, szusz-5