171659. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás ergolinvázas alkaloidok kinyerésére és szelektív elkülönítésére

3 171659 4 sa volt, amely az eddig ismert módszerek hátrányait kiküszöböli, és amellyel a vízoldható és vízben nem oldódó ergolinvázas alkaloidok az eddigi módszereknél jobb hatásfokkal gyógyszerkönyvi minőségben nyerhetők ki, valamint a kísérőanyagok lényegében alkaloid-veszteség nélkül különíthetők el. Kísérleteink során azt találtuk, hogy ha az extrakciót oly kétfázisú, 1—8 : 0,01—0,4 arányú oldószereleggyel végezzük, amely vízzel korlátlan elegyedő szerves oldószert és valamely bázist, előnyösen ammóniumhidroxidot, vagy trietilamint, valamint annyi vizet tartalmaz, amennyit a kivonatolandó anyag megköt és ily módon a kivonat egyfázisú lesz, úgy lényegesen jobb kitermelést érünk el. Továbbá azt találtuk, hogy ha a kivonat bepárlásával nyert maradékot, amely az ergolinvázas alkaloidok mellett sokszoros, mintegy ötvenszeres menynyiségű kísérőanyagot tartalmaz, valamely alkanol, alifás karbonsav és víz terner elegyében oldjuk és ezt az oldatot valamely telített cikloalifás vagy alifás szénhidrogénnel kivonatoljuk, úgy a kísérőanyagok ergolinvázas alkaloid veszteség nélkül vihetők át a szénhidrogén fázisba. Ha a kísérőanyagokat tartalmazó felső szénhidrogén fázist elválasztjuk és a visszamaradó alsó fázist tömény ammóniumhidroxid oldattal legfeljebb 10 pH értékig meglúgosítjuk, majd a lúgos oldatot vízzel nem elegyedő és vízzel korlátoltan elegyedő oldószerpárral kivonatoljuk és a fázisokat elválasztjuk, a vízzel nem elegyedő és a vízzel korlátoltan elegyedő szerves fázis bepárlása után olyan szárazmaradékot kapunk, amely részint mentes a kísérőanyagoktól és a vízben oldódó, illetve oldhatatlan ergolinvázas alkaloidokat még együtt tartalmazza. Ha ezt a szárazmaradékot valamely klórozott szénhidrogénben előnyösen kloroformban oldjuk, majd a kloroformos oldatot valamely alifás karbonsav híg vizes oldatával kivonatoljuk, a vízben oldódó ergolinvázas alkaloidok a vizes fázisba oldódnak át, míg a vízben nem oldódó ciklikus peptíd alkaloidok a kloroformos fázisban maradnak, innen az alkaloidokat kísérő szennyezések végül tömény ammóniumhidroxid oldattal végzett kivonatolással igen előnyösen távolíthatók el. Találmányunk tehát az alábbi négy felismerésen alapszik: 1. Mindkét típusú ergolinvázas alkaloid igen hatásos kivonatolása oly kétfázisú oldószereleggyel végezhető, amely vízzel korlátlan elegyedő szerves oldószert, bázist és vizet tartalmaz. 2. A kísérő anyagok eltávolítása a szárazra párolt extraktum alkanol, alifás karbonsav, víz terner oldatából telített cikloalifás vagy alifás szénhidrogénnel végezhető. 3. A vízben oldódó és vízben oldhatatlan ergolinvázas alkaloidok klórozott szénhidrogénes oldatukból híg vizes alifás karbonsavval végzett kivonatolás útján elválaszthatók. 4. A vízben nem oldódó ergolinvázas alkaloid-oldat végső tisztítása a szennyezéseknek tömény ammóniumhidroxid oldattal való kivonatolása révén elvégezhető. Az eljárásunk során keletkező jobbra forgató alkaloidmódosulatok képződésének megakadályozását nem kell lényeges szempontnak tekintenünk, mert a szakirodalomból oly hatásos konvertálási eljárásokat ismerünk, amelyekkel a balra forgató módosulatokká történő visszaalakítást egyszerű módon végezhetjük el [A. Hofmann: Die Mutterkorn-alkaloide. ENKE Verlag. Stuttgart, 1964]. A találmány új eljárás ergolinvázas alkaloidok ki-5 nyerésére és szelektív elkülönítésére anyarozs drogból vagy claviceps gombák szaprofita tenyészetéből vízzel korlátoltan elegyedő szerves oldószerrel végzett kivonatolás és ezt követő fázismegosztások útján, oly módon, hogy az anyarozs drogot, vagy a szaprofita 10 tenyészetet vízzel korlátoltan elegyedő szerves oldószert, bázist és vizet tartalmazó 1—8 :0,01—0,4 arányú kétfázisú oldószer-eleggyel kivonatoljuk, a kivonatot elválasztjuk, majd besűrítjük, a maradékot valamely 1—4 szénatomszámú alkanol, telített alifás karbonsav és víz 15 1:0,5—2:0,5—2 arányú terner elegyében oldjuk, az oldatot valamely 6—8 szénatomszámú telített cikloalifás vagy 5—8 szénatomszámú telített alifás szénhidrogénnel kivonatoljuk, a fázisokat elválasztjuk az oldószeres fázist legfeljebb 10 pH-értékig meglúgosítjuk, a 20 lúgos oldatot ismert módon 1:0,1—0,5 arányú vízzel nem elegyedő és vízzel korlátoltan elegyedő oldószerpárral, előnyösen kloroform-i-propanol elegyével kivonatoljuk, a fázisokat elválasztjuk, a szerves fázist bepároljuk, a szárazmaradékot ismert módon kloroformban 25 oldjuk, az oldatot ismert módon legalább 1%-os, előnyösen 5%-os vizes 1—4 szénatomszámú, telített alifás karbonsavval, előnyösen ecetsavval kivonatoljuk, a fázisokat szétválasztjuk, híg vizes savas oldatból a vízoldható ergolinvázas alkaloidokat bázis vagy só alak-30 jában ismert módon kinyerjük, a kloroformos fázisból tömény ammónium-oldattal végzett kivonatolással a még jelenlevő szennyezéseket eltávolítjuk, a kloroformos fázisból a vízben nem oldódó ergolinvázas alkaloidokat bázis vagy só alakjában ismert módon kinyerjük. 35 Találmányunk értelmében oly módon járunk el, hogy anyarozsot alkalmazva kiindulási anyagként azt tömény ammóniumhidroxid oldat vagy valamely szerves bázis, mint például a trimetilamin, a trietilamin jelenlétében vízben korlátoltan oldódó szerves oldószerrel 40 kivonatoljuk. Vízben korlátoltan oldódó oldószerként például dietilkarbonátot, propilacetátot, butilacetátot, vagy előnyösen etilacetátot alkalmazhatunk. A kivonatolt drogot a kivonattól elválasztjuk. A kivonatolást ezután célszerűen egy vagy több ízben megismételjük. 45 A kivonatokat egyesíthetjük, de eljárhatunk úgy is, hogy a második és/vagy további extraktumot nem dolgozzuk tovább, hanem tömény ammóniumhidroxid oldattal történő elegyítés után újabb anyarozs első kivonatolásához használjuk fel. 50 Abban az esetben ha szaprofita tenyészetből indulunk ki, úgy az ergolinvázas alkaloidokat tartalmazó micéíiumot kiszűrjük, majd felaprítjuk, azután az őrölt micéliumot az anyarozsnál leírt módon kivonatoljuk. A kivonatot csökkentett nyomáson 50 C° alatti hő-55 mérsékleten besűrítjük. A besűrítést a gyakorlati oldószermentesítésig végezzük, és nem az oldószernyomok eltávolításáig, mert a feleslegesen hosszú ideig tartó hőkezelés az ergolinvázas alkaloidok felesleges bomlását segítené elő. 60 A besűrítés során kapott, az ergolinvázas alkaloidokat, zsírokat, pigmenteket és egyéb kísérőanyagokat tartalmazó maradékot — amely sűrűn folyós vagy gyantaszerű — ezután oldószerelegyben feloldjuk. Az oldószerelegy minden esetben vizet, valamely 1—4 szénatom-65 számú alifás alkanolt és 1—6 szénatomszámú, telített 2