171615. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új oktapeptidszármazékok előállítására
171615 , 5 o távolítása után a nyers tripeptid-hidrobromidot Z-Asn-ONp-vel [előállítását lásd: Bodánszky, M. és du Vigneand, V.: J. Am. Chem. Soc, 81, 5688 (1959)] a Z-Asn-Arg(N02)-Val-Tyr(Br 2 )-OH védett tetrapeptiddé (továbbiakban: 5. vegyület) kapcsol- 5 juk. Az 5. vegyületet ezután vegyes savanhidrid-módszerrel tributil-amin jelenlétében a H-Val-His-Pro-Phe-OtBu [előállítását lásd: Schröder, E., Ann. 680, 132 (1964)] tetrapeptidészterrel a Z-Asn-Arg(N02)-Val-Tyr(Br 2 )-Val-His-Pro-Phe-OtBu 10 védett oktapeptiddé (továbbiakban: 6. vegyület) alakítjuk. A 6. vegyület terc-butoxicsoportját ezután acidolízissel, célszerűen trifluorecetsawal lehasítjuk majd a kapott nyers Z-Asn-Arg(N02)-Val-Tyr(Br 2 )-Val-His-Pro-Phe-OH képletű oktapeptidet (továb- 1S biakban: 7. vegyület) oszlopkromatográfiásan tisztítjuk szilikagélen, futtatószerként etil-acetát, piridin, ecetsav és víz 60 : 20 : 6 :11 arányú elegyét használva. A tisztított 7. vegyület összes védőcsoportját ezután egyetlen lépésben cseppfolyós hid- 20 rogén-fluoriddal távolítjuk el amikor is H-Asn-Arg-Val-Tyr(Br2 )-Val-His-Pro-Phe-OH • 3HF képletű oktapeptidet (magát a szabad bázist továbbiakban 8. vegyületnek fogjuk nevezni) kapunk. Ezt a sót ezután ioncserélőoszlopon acetátsóvá alakítjuk majd 25 kétféleképpen alakítjuk tovább. Az egyik módszer az, amikor az acetátsót dimetil-formamid és víz elegyében trietil-amin jelenlétében katalitikus hidrogénezésnek vetjük alá. Ek- 30 kor X és Y helyén egyaránt hidrogénatomot hordozó I általános képletű vegyületet (vagyis a találmány oltalmi körén kívül eső vegyületet) kapunk. Ez a vegyület ismert módon például műtéti sokk kivédésére használható. Kívánt esetben ez az okta- 35 peptid karboximetil-cellulózt tartalmazó oszlopon tisztítható. A másik módszer abban áll, hogy az acetátsót triciumgázban végzett katalitikus redukció útján a 2. vegyületté aiakítjuk. [A triciumgázzal végzett re- 40 dukálást Márton, I. és Kovács A. módszerével (Acta Chim. (Budapest), 73 11/1972) végezhetjük.] Ez az oktapeptid is kívánt esetbén karboximetil-cellulózt tartalmazó oszlopon tisztítható. 45 Az I általános képletű vegyületek közül az X helyén hidrogénatomot és Y helyén klór, illetve triciumatomot hordozó vegyületeket az alábbiakban ismertetett módon állfliatjuk elő: A 4-klór-L-fenil-alanint először tionil-klorid je- 50 lenlétében metanollal észterezzük, majd az így kapott 4-klór-L-fenilalanin-metilészter-hidrokloridot (továbbiakban: 9. vegyület) DCC-módszerrel Boc-Pro-OH védett aminosavhoz kapcsoljuk, amikor is a Boc-Pro-Phe(Cl)-OMe képletű védett dipeptid- 55 észtert (továbbiakban: 10. vegyület) kapjuk. A 10. vegyület védőcsoportját ezután célszerűen 1 n sósavas metanollal végrehajtott acidolízis útján lehasítjuk, amikor is hidrokloridsó formájában a H-Pro-Phe(Cl)-OMe dipeptidésztert (továbbiak- 60 ban: 11. vegyület) kapjuk. Ezt a hidrokloridsót ezután azid-módszerrel Z-Val-His-NHNN2 képletű dipeptiddel [előállítását lásd: Schwyzer, R., Iselin, B. és Kapeller, H. :Helv. Chim. Acta 41, 1287 (1958)] kapcsoljuk, majd az így kapott Z-Val-His- 65 -Pro-Phe(Cl)-OMe védett tetrapeptidészter (továbbiakban: 12. vegyület) védőcsoportjait jégecetes hidrogén-bromiddal lehasítjuk. A H-Val-His-Pro-Phe(Cl)-OMe tetrapeptid nyers hidrobromidsóját ezután vegyes savanhidrid-módszerrel tributil-amin jelenlétében a Z-Asn-Arg(N02 )-Val-Tyr-OH védett tetrapeptiddel kapcsoljuk, amikor is a Z-Asn-Arg(N02 )-Val-Tyr-Val-His-Pro-Phe(Cl)-OMe védett oktapeptidészert (továbbiakban: 13. vegyület) kapjuk. A Z-Asn-Arg(N02 )-Val-Tyr-OH tetrapeptidet például az 55 334 számú német demokratikus köztársaságbeli szabadalmi leírásban ismertetett módon állíthatjuk elő. A nyers 13. vegyületet ezután nátrium-hidroxiddal Z-Asn-Arg(N02 )-Val-Tyr-Val-His-Pro-Phe(Cl)-OH képletű oktapeptiddé (továbbiakban: 14. vegyület) hidrolizáljuk, majd a kapott nyers 14. vegyületet szflikagélt tartalmazó oszlopon kromatográfiásan tisztítjuk eluálószerként etil-acetát, piridin, ecetsav és víz 60 :20 : 6 : 11 arányú elegyét használva. A tisztított 14. vegyület védőcsoportjait ezután cseppfolyós hidrogén-fluoriddal lehasítjuk, amikor is az X helyén hidrogénatomot és Y helyén klóratomot tartalmazó I általános képletű vegyületet (továbbiakban 15. vegyület) kapjuk trihidrogénfluoridsó formájában. Ezt a sót azután ioncserélőoszlopon a megfelelő acetátsóvá, majd az utóbbit dimetil-formamid és víz elegyében trietil-amin jelenlétében és triciumgázban végzett katalitikus redukció útján az X helyén hidrogénatomot és Y helyén triciumatomot hordozó I általános képletű vegyületté (továbbiakban: 16. vegyület) alakíthatjuk. Kívánt esetben karboximetil-cellulózt tartalmazó oszlopon a kapott 16. vegyület továbbtisztítható. Az I általános képletű vegyületek közül a triciumatomot tartalmazók biológiai aktivitása megegyezik a biokémiai gyakorlatban standardként elterjedten használt Hypertensin-preparátum (gyártja a Ciba-Geigy svájci cég) aktivitásával. Az I általános képletű vegyületek kémiai tisztaságát ugyanakkor az bizonyítja, hogy mind savas, mind enzimatikus hidrolízis után aminosav-analízissel meghatározott aminosav-összetételük megfelelő. Az Y helyén klóratomot hordozó I általános képletű vegyület biológiai aktivitása megközelíti az előbb említett standard preparátumét, míg az X helyén brómatomot hordozó I általános képletű vegyület vérnyomásnövelő hatása a standard preparátum hatás 30-40%-ának felel meg. A találmányt közelebbről az alábbi kiviteli példákkal kívánjuk megvilágítani. A kiviteli példákban említett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatok végrehajtásához az alábbi oldószerrendszereket használjuk (a példákban az Rf -értékeknél szereplő szám az oldószerrendszer sorszáma): 1. Etilacetát-piridin-ecetsav-víz = 15 : 20 : 6 : 11 2. Etilacetát-piridin-ecetsav-víz = 30 : 20 : 6 : 11 3. Etilacetát-piridin-ecetsav-víz = 60 : 20 : 6 :11 4. Etilacetát-piridin-ecetsav-víz = 120 : 20 : 6 :11 5. Etilacetát-piridin-ecetsav-víz = 240 : 20 : 6 : 11 3
