171615. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új oktapeptidszármazékok előállítására
7 171615 8 1. példa a) 3,5-dibróm-L-tirozin-metilészter-hidroklorid 200 ml vízmentes metanolt -15C°-ra hűtűnk, majd keverés közben 20 ml tionil-kloridot csurgatunk a metanolba. Ezután további hűtés közben 35 g 3,5-dibróm-tirozint adunk az így kapott oldathoz. A szilárd anyag közel fél óra alatt feloldódik, majd rögtön újra kikristályosodik. Ekkor a hűtést megszüntetjük, és a reakcióelegyet 3 órán át 45 C°-on keverjük. Az így kapott oldatot (a csapadék ugyanis közben oldódott) vákuumban bepároljuk, majd a maradékot 150 ml forró metanolban oldjuk, derítjük és szűrjük. A szűrőt kétszer 20 ml forró metanollal átmossuk, majd kétszeres mennyiségű dietiléterrel (380 ml) kristályos anyagot csapunk ki. Hűtőszekrényben állni hagyjuk, 2 :1 arányú éter-metanol eleggyel, végül éterrel mossuk, vákuumban szárítjuk. A színtelen kristályos anyag súlya 39,85 g, kitermelés 98,5%, Rf 3 :0,6. [<*]D = +8,8° (c = 1 metanol) Analízis (molekulasúly: 389,5) számított: talált: N =3,6%, H =3,09%, N =3,53%, H = 3,3%. C =30,85%, C =30,83%, 10 15 20 25 30 c) Z-Arg(N02 )-Val-Tyr(Br 2 )-OH (4. vegyület) 8,3 g 3. vegyületet 120 ml tetrahidrofuránban szuszpendálunk, majd a szuszpenzióhoz keverés közben lassan 25 ml n nátrium-hidroxid-oldatot adunk. A szuszpenzió közben oldódik. A szerves oldószert ezután vákuumban 30C°-os fürdőből ledesztilláljuk, a vizes oldatot pedig szűrjük és 6n sósavoldattal savanyítjuk. A kivált anyagot néhány órán át jégszekrényben állni hagyjuk, szűrjük és vízzel mossuk. A nedves anyagot 300 ml forró 66%-os vizes etanolban feloldjuk. A lehűlés után kivált géles anyagot néhány órán át hidegen állni hagyjuk, szűrjük, majd 50%-os hideg etanollal, ezután pedig vízzel bőven mossuk. A nagy térfogatú széles anyagot kétszer 60 ml 2:1 arányú éter-aceton eleggyel, majd végül többször éterrel mossuk, vákuumban szárítjuk. Fehér szilárd anyagot kapunk, amelynek súlya 6,05 g. Op. 194-196 C° kitermelés: 74,4%. Rf s : 0,195. MD=+ 4,0° Analízis (i (c=l,0,DMF) molekulasúly: 787,2) számított: talált: C =43,5%, N = 12,7%, C =43,57%, N = 12,67%, H = Br = H = Br: = 4,53%, = 20,7%, = 4,59%, = 20,77%. d) Z-Asn-Arg(N02 )-Val-Tyr(Br 2 )(5. vegyület) OH b) Z-Arg(N02 )-Val-Tyr(Br 2 )-OMe (3. vegyület) 9,1 g Z-Arg(N02 )-Val-OH-t feloldunk 40 ml vízmentes dimetil-formamidban, majd a kapott oldatot —30 C°-ra hűtjük, és keverés közben 5 ml (3,8 g) tributil-amint adunk az oldathoz. Közel 10 perc múlva hűtés és keverés közben 2 ml (2,26 g) klórhangyasav-etilésztert csurgatunk a reakcióelegybe, majd az utóbbit ~30C°-on reagálni hagyjuk fél órán át. Eközben 8,2 g 3,5-dibróm-tirozin-metilészter-hidrokloridot feloldunk 40 ml dimetil-formaimdban, -30 C°-ra hűtjük, majd a hideg oldathoz 5,1 ml tributil-amint adunk. Az így kapott kristályszuszpenziót az előbb ismertetett vegyes savanhidrid-oldathoz adjuk. A reakcióelegyet ezután másfél órán át -10C°-on reagáltatjuk, majd egy éjjelen át állni hagyjuk. A reakcióelegyet ezután vákuumban bepároljuk, a maradékot pedig 30 ml vízmentes etanolban oldjuk fel. Ezután 100 ml desztillált víz hozzáadásával kristályos anyagot csapunk ki, majd szűrjük és vízzel mossuk. A szilárd anyagot ezután egy éjjelen át szobahőmérékleten szárítjuk, majd a nyers tripeptid-észtert 800 ml forró 50%-os etanolban oldjuk és kevés oldatlan anyagtól szűrjük. Az oldat lehűlésekor fehér kristályos anyag válik ki. Az utóbbit hideg 50%-os etanollal, majd kevés metanollal, végül éterrel bőven mossuk, szárítjuk. A kapott színtelen kristályos anyag súlya: 9,9 g, op. 220-223 C°, termelés: 63%. Rf s :6,6. [a]D =-5,5° (c = 2,0,DMF) 35 40 45 50 55 60 4,9 g (6,35 mmól) 4. vegyületet szuszpendálunk 25 ml jégecetben, a szuszpenzióhoz pedig 25 ml 4n jégecetes bróm hidrogénsavat adunk. A reakciá elegyet 1 órán át állni hagyjuk, miközben oldat képződik. Ezután az oldathoz 200 ml vízmentes étert adunk. Fehér kristályos anyag válik ki. Az oldatot fél óra múlva dekantáljuk és friss éter adagolásával állni hagyjuk, majd ismét dekantálunk és ezt az eljárást még kétszer megismételjük. Végül a kristályos anyagot szűrjük, majd éterrel mossuk. Az anyagot ezután azonnal 60 ml dimetil-formamidban oldjuk. Az oldat pH-ját trietil-aminnal semlegesre beállítjuk, majd az oldathoz 2,72 g Z-Asn-ONp 10 ml dimetil-formamiddal készült oldatát adjuk. A reakcióelegyet 3 napon át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, majd a sűrűn folyó maradékot 20 ml etanollal elkeverjük. Ezután 120 ml vízzel szilárd anyagot csapunk ki. Az utóbbit -kiszűrjük, vízzel mossuk és vákuumban szárítjuk, A kapott halványsárga anyag súlya 5,7 g. A fenti nyers terméket ezután 100 ml acetonnal forrón digeráljuk, majd lehűlés után szűrjük, acetonnal mossuk és vákuumban szárítjuk. Súly: 5,15 g. Op.: 201-203 C°, Rf 4 :0.19 R f 3 :0,63. [a]D =-3° (c= 1 DMF), [a]D ] =-4,0° (c= l,AcOH) Analízis (molekulasúly: 887,6): számított: talált: 65 C =43,3%, N = 14,2%, C =42,95%, N = 1-4,28%, H = 4,7%, Br = 18,0%, H = 4,69%, Br= 17,96%. 4
