171544. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vírus- és baktérium-vakcinák előállítására inaktiválással
3 171544 4 A találmány értelmében a fertőző vírusokat vagy baktériumokat oldatban vagy szuszpenzióban 0 és 45 C° közötti hőmérsékleten, néhány óra és 2 nap közé eső időn át 0,005-2 térfogat% végkoncentrációig etiléniminnel kezeljük, utána adott esetben az etilénimin-felesleget nátriumtioszulfát-oldattal megbontjuk, és az inaktivált vírusokat vagy baktériumokat tartalmazó oldatot vagy szuszpenziót alkalmas oldószerekkel és/vagy közömbös nemtoxikus szilárd, félszilárd vagy folyékony hordozóanyagokkal végzett hígítással, adott esetben emulgeáló- és/vagy diszpergálószerek, porlasztó és hajtószerek és adott esetben stabilizátorok hozzáadásával önmagában ismert módon vakcinává alakítjuk. A találmány értelmében etiléniminnel inaktivált vírus- és baktériumtörzsek megelőzésére és vírus- és baktériumfertőzések kezelésére használhatók mind a humán-, mind az állatgyógyászatban. A találmány szerinti eljárással előállított vírusvagy baktérium-antigéneket a szokásos módon készíthetjük el és oldat, szirup, emulzió, szuszpenzió, spray, kenőcs, paszta, krém, aeroszol, tabletta stb. alakjában adagolhatjuk. A készítményeket önmagában ismert módon állítjuk elő, például úgy, hogy a találmány szerinti inaktivált vírus- vagy baktérium-készítményeket alkalmas oldószerekkel és/vagy közömbös, nem mérgező, szilárd, félig szilárd vagy folyékony hordozóanyagokkal felhígítjuk és adott esetben emulgeálóés/vagy diszpergálószereket, porlasztó- és hajtóanyagokat és alkalmas stabilizálószereket is alkalmazunk. Oldószerként, hordozóanyagként, emulgeáló-, illetve diszpergálószerként megnevezzük az alábbiakat: Víz, nem mérgező szerves oldószerek, illetve hígítószerek, így paraffinok (például ásványolajfrakciók), növényi eredetű olajok (például földimogyoró-, szezámolaj), alkohol (például etanol, glicerin), glikolok (például propilénglikol, polietilénglikol) és víz, szilárd hordozóanyagok, így természetes kőlisztek (például nagydiszperzitású kovasav, szilikátok), cukrok (például nádcukor, tejcukor és szőlőcukor), alumíniumhidroxid, poliszacharidok (dextránok, agar), emulgeálószerek, így nemionos és anionos emulgeátorok (például polioxietilénzsír sav-észterek, polioxietilénzsíralkohol-éterek, alkilszulfönátok és arilszulfonátok), diszpergálószerek (például lignin, szulfitszennylúgok, metilcellulóz, keményítő és polivinilpirrolidin) és tapadást gátló szerek (például magnéziumsztearát, talkum, sztearinsav és nátriumlaurilszulfát). Stabilizálószerként az alábbiakat soroljuk fel: aminosavak, cukrok, proteinek, poliszacharidok, polialkilénglikolok. Ezeket a stabilizálószereket mind vizes oldatban, mind liofilizált állapotban adagolhatjuk. A találmány szerint inaktivált vírus- vagy baktériumtörzseket, illetve az ezekből kapott gyógyszerkészítményeket a szokásos módon alkalmazhatjuk, például orálisan, intramuszkulárisan, intraperitoneálisan, szubkután, helyileg, mindenekelőtt az emberi vagy állati test összes nyálkahártyáján. A találmány szerinti eljárást az alábbi példákki közelebbről megvilágítjuk. A példákban említel sejtkultúrák például a Flow Laboratories Ltd. cégtí vagy az American Type Culture Collectiontól besz< 5 rezhetők, vagy a szövettenyésztés ismert módszen szerint tenyészthetők. A példákban szereplő mikroorganizmusok min hozzáférhetők vagy kutatóintézetekből kutatási a 10 lókra beszerezhetők. Az MKS- és IBR/IPV-vírustöi zsek a Bundesforschungsanstalt für Viruskrankheite der Tiere (NSZK, Tübingen) intézetben szerezhető be hivatalosan, az MKS-vírustörzsek ezenkívül b< szerezhetők a nagy-britanniai Animal Virus Researc 15 Institute, World Reference Center-nél is. 1. példa 20 A C) típusú száj- és körömfájás-vírus (MKS 8,0 pH-értékű oldatához, borjúheresejtek permaner megfertőzött kultúrájának centrifugált kultúrfoly; deka alakjában, 0,03 tf-% koncentrációig etüénimii adunk 2 térfogat%-os semlegesített oldat alakjába; 25 Az elegyet keverés közben 37 C°-on tartjuk. Megh tározott időpontokban mintákat veszünk. Az inakt válási reakciót 10 tf% 20%-os nátriumtioszulfát-oldi hozzáadásával állítjuk meg. Ezután a próbákat híg tatlanul vagy tízszeres léptékekben hígítva 10-1 30 primer borjúvesesejteket tartalmazó szövetkultúr; kémcsőbe visszük 0,1 ml mennyiségben és így átoltá végzünk. Az így meghatározott vírustiter az ic növekedésével csökkenést mutat, az idő és vírustit közti összefüggés elsőrendű reakciónak felel me 35 3 óra múlva 0,5 ml mennyiség átoltása esetében se mutatható ki többé fertőzőképesség. Az l.sz.áb 1. sz. görbéje a C) típusos MKS-vírus inaktiválásán időbeli lejátszódását mutatja 37 C°-on és 8,0-pH-értéken. Az ordinátára a fertőző egységek logari 40 musát, az abszcisszára az inaktiváló hatás időtartam - órákban - vittük fel (a fertőző egységek logari musa a hígítási lépték negatív logaritmusának fel meg, pl.: 107 -szeres hígítás esetében 10 7 fertő; egység, vagyis a fertőző egységek logaritmusa 7.) 45 fertőző vírusok kimutathatóságának határa az alkí mázó teszt-módszertől függően 0 és —1 közé esik. i 1. sz. ábra 1. sz. görbéje az inaktiválás lejátszódás 0,03 térfogat% végkoncentráció esetén mutatja. 50 Egy 4 órán át ilyen módon kezelt vírus-oldatl 20 db 3—4 napos egeret fertőzünk meg intrape toneálisan 0,1 ml oldat mennyiséggel, és 1,51 mennyiséggel 5 db tengerimalacot oltunk be szí kután. Az állatok nem mutatnak semmilyen bete 55 ségre utaló tünetet. 3 héttel az oltás után az öss2 tengerimalac szérumában neutralizáló antitestet m tatunk ki a kezeletlen, fertőző kiindulási vírus: szemben. 60 Az inaktivált vírus-oldat komplementmegkötő 1 pessége azonos a kezeletlen, aktív kiindulási vírus* datával (az antigének koncentrációját az ismi komplementkötő-teszttel határozzuk meg. Ma{ komplementkötő képesség tehát magas antigéntifc 65 jelent). 2
