171245. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szintetikus kalcitoninok vagy kalcitonin-származékok tisztítására
MAGYAR SZABADALMI 171245 NÉPKÖZTÁRSASÁG LEÍRÁX Bejelentés napja: 1974. XII. 13. (Cl—1530) Elsőbbsége: Svájc 1973. XII. 14. (017 550/73) Nemzetközi osztályozás: C 07 C 103/52 Közzététel napja: 1977. július 28. ,.,- " '"" "" ."' "' " -ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI - ^ • ! i Oi- .-• HIVATAL Megjelent: 1978. VII. 31. Feltalálók: dr. Rittel Werner vegyész, Bázel, dr. Bfugger Max vegyész, Birsfelden, dr. Riniker Bernhard vegyész,'Frenkendorf, Svájc Tulajdonos: Ciba-Geigy AG, Bázel, Svájc Eljárás szintetikus kalcitoninok vagy kalcitonin-származékok tisztítására í A találmány tárgya új, egyszerű eljárás 5 és 10 közötti pH-értéknek megfelelő izoelektromos ponttal rendelkező kalcitoninok és kalcitonin-származékok tisztítására, melynek során a kalcitonin-származékot valamely savval vagy bázissal alkotott sójának vizes olda- 5 tából a pH-nak az izoelektromos tartományba történő beállításával belső sójaként csapjuk ki, és kívánt esetben önmagában ismert módon valamely vízben oldódó sójává alakítjuk át. A hosszúláncú peptidek peptidfragmentekből törté- 10 nő szintetikus előállításánál általában több vagy kevesebb mennyiségű melléktermék keletkezik, amelyeket nehéz elválasztani. így az aminosavláncban egyes aminosavcsoportok diasztereomer alakban állhatnak, például a Sieber és munkatársai [Helv. Chim. Acta, 53, 15 2135—2150 (1970)] által leírt szintézis során, az emberi kalcitonin Leu4-, Leu 9 -, Thr6-, Phe 16 - és His^-csoportjainál. Ezenkívül a kéntartalmú peptideknél alkileződés vagy N-»0-acilvándorlás léphet fel, melyet ugyancsak a fenti cikkben ismertetnek. Ezen melléktermékek el- 20 választására a hosszabb védett fragmenteknél, és/vagy a teljes védett peptid esetében és/vagy magánál a végterméknél tisztítási műveleteket, például ellenáramú megoszlatást, elektroforézist vagy kromatográfiát kell alkalmazni. E műveletek az ilyen hosszúláncú peptidek 25 előállítását megnehezítik nagyobb méretű előállítás esetén, mivel nagy mennyiségű abszorbensek és/vagy oldószerek szükségesek, melyek nehezen, illetve jelentős költséggel regenerálhatok csak. A Helv. Chim. Acta 53, 2135 (1970) cikke ismerteti 30 ugyan, hogy a kalcitonin M enyhén savas oldatból kiválik asszociátumok képződése közben, nem tesz említést azonban azok természetéről és tisztaságáról, ezenkívül az anyagot tisztított formában alkalmazzák. Új, igen egyszerű tisztítási módszert dolgoztunk ki kalcitonin-típusú, körülbelül 5 és 10 közötti pl-értékű (izoelektromos pontú) peptidek tisztítására. Az eljárás során a kalcitonin-peptidet savval vagy bázissal alkotott sójának vizes oldatából a pH-nak az izoelektromos tartományba történő beállításával belső sójaként csapjuk ki. Az izoelektromos „tartomány" elnevezést azért használjuk, mert ezeknél a vegyületeknél az izoelektromos pont nem élesen definiált, hanem nagyobb pH-tartományra terjed ki, lásd Kortüm, Lehrbuch der Elektrochemie, Verlag Chemie, Weinheim, 1966, 336. oldal. Izoelektromos tartomány alatt a pl-érték körül körülbelül ± 1 pH-értéket értünk. A fentiekben ismertetett kicsapással a peptidet nagy tisztaságban kapjuk, mivel a fentiekben említett melléktermékek nem csapódnak ki, illetve O-acilszármazékok esetén azok az N-acilszármazékokká alakulnak vissza. A termékek tisztasági foka megegyezik azon termékékével, melyeket kétszeresen tisztítottak ellenáramú megoszlatással, mégpedig egyszer a védett vegyületeknél, és egyszer a végtermék esetében [lásd például Helv. Chim. Acta, 53, 2135 (1970)]. Akkor is nagy tisztaságú peptideket kaphatunk, ha a védett végterméket (a védett dotriakontapeptidamidot) nem ellenáramú megoszlatással stb., hanem kicsapással tisztítjuk. A tisztítási művelet során fellépő vesztéségek kisebbek; 171245 1~
