171243. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új dotriakontapeptidamidok előállítására
33 171243 34 tot (dioxánban) és 0,29 ml terc-butil-nitritet adunk. A reakcióelegyet ezután hagyjuk —12 CC hőmérsékletre felmelegedni és 15 percig ezen a hőmérsékleten keverjük. Az elegyhez 0 °C hőmérsékletre lehűtött oldatot csepegtetünk, melyet 1,65 g H—Thr(tBu)—Phe— —Pro—Gin—Thr(tBu)—Asn—He—Gly—OH-ból, 1,2 ml metanolos, 40%-os trimetil-benzil-ammónium-hidroxid-oldatból és 30 ml dimetil-formamidból, valamint 6 ml vízből készítünk. A reakcióelegyet jéghűtés közben keverjük, melyhez 30 perc alatt 1,1 ml N-etil-diizopropil-amint adunk, majd 5 óra hosszat 0 °C hőmérsékleten állni hagyjuk, miközben kocsonyás csapadék válik ki. A reakcióelegyet ezután 300 ml 1%-os ecetsavra öntjük, 2 óra hosszat 0 °C hőmérsékleten keverjük, majd a csapadékot szűrjük, vízzel mossuk és szárítjuk. A kapott termékhez 50 ml metanolt adunk, 2 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük, majd a metanolban nem oldódó Z—Asn—Lys(Boc)—Phe—His—Thr-(tBu)—Phe—Pro—Gin—Thr(tBu)—Asn—lie—Gly— —OH-t leszűrjük. Kitermelés 399 mg. Vékonyréteg-kromatográfia szilikagél-lemezen (Rf(100)=0,18; R,<52) = 0,24; Rf (70) = =0,33. l)Z—Asn—Lys(Boc)—Phe—His—Thr(tBu)—Phe— —Pro—Gin—Thr(tBu)—Asn—lie—Gly—Val—Gly— —Ala—Pro—NH2 420 mg Z—Asn—Lys(Boc)—Phe—His—Thr(tBu)— —Phe—Pro—Gin—Thr(tBu)—Asn—lie—Gly—OH, 55 mg N-hidroxi-szukcinimid és 7 ml dimetil-formamid elegyéhez keverés közben 62 mg diciklohexil-karbodiimidet és 103 mg H—Val—Gly—Ala—Pro—NH2-t adunk. A reakcióelegyet ezután 45 °C-ra melegítjük és 5 óra hosszat ezen a hőmérsékleten keverjük. Az elegyet ezután 0 °C hőmérsékletre hűtjük és 80 ml jéghideg éterre öntjük. A kivált csapadékot leszűrjük, szárítjuk, majd további tisztítás céljából egyszer dimetil-formamid és aceton elegyből, ezután dimetil-formamid és acetonitril elegyből ismét kicsapjuk. Az eljárással 420 mg címben megadott hexadekapeptidet kapunk. Vékonyréteg-kromatográfia szilikagél-lemezen: Rf (100) = 0,25; Rf(107) = 0,60. m) H—Asn—Lys(Boc)—Phe—His—Thr(tBu)— —Phe—Pro—Gin—Thr(tBu)—Asn—He—Gly—Val— —Gly—Ala—Pro—NH2 Az l) eljárás szerint előállított 395 mg terméket 25 ml 80%-os ecetsavban, 100 mg 10%-os palládium-csontszén jelenlétében hidrogénezzük. A hidrogénezés befejezése után a katalizátort leszűrjük és az oldatot szárazra pároljuk. A kapott 380 mg termék szilikagél-lemezen végzett vékonyréteg-kromatográf szerint kiindulási anyagot nem tartalmaz. Rf (107)=0,30. n) Z—Thr(tBu)—Tyr(tBu)—Thr(tBu)—Gin—Asp-(OtBu)—Phe—Asn—Lys(Boc)—Phe—His—Thr(tBu) Phe—Pro—Gin—Thr(tBu)—Asn—lie— —Gly—Val—Gly—Ala—Pro—NH2 358 mg Z—Thr(tBu)—Tyr(tBu)—Thr(tBu)—Gin— —Asp(OtBu)—Phe—NHNH2 -t melegítés közben 3 ml dimetil-formaniidban oldunk, az oldatot —20 °C hőmérsékletre hűtjük, melyhez 0,26 ml 3,2 n sósav-oldatot (dioxánban), és ezután 0,045 ml terc-butil-nitritet adunk. A reakcióelegyet 15 percig —15 °C hőmérsékleten keverjük, majd 0 °C hőmérsékletre hűtött, 380 mg 5 m) eljárás szerint előállított termékből, 10 ml dimetil-formamidból, 2 ml vízből, 1 ml acetonitrilből, 2 ml dimetil-szulfoxidból és 0,2 ml N-etil-diizopropil-aminból készített oldatot adunk hozzá és 18 óra hosszat 0 °C hőmérsékleten keverjük. A kicsapódott terméket 10 leszűrjük, majd kétszer dimetil-formamid és etil-acetát elegyből kicsapva tisztítjuk. A kapott port 20 ml metanollal elkeverjük, a metanolban nem oldódó terméket leszűrjük és szárítjuk. Az eljárással 240 mg címben megadott peptidet kapunk. 15 Vékonyréteg-kromatográfia szilikagél-lemezen: Rj(43Q = 0( 40; R f (100) = 0,28; R f (96)=0,42. o) H—Thr(tBu)—Tyr(tBu)—Thr(tBu)—Gin— —Asp(OtBu)—Phe—Asn—Lys(Boc)—Phe—His— 20 —Thr(tBu)—Phe—Pro—Gin—Thr(tBu)—Asn—lie— —Gly—Val—Gly—Ala—Pro—NH2 Az n) eljárás szerint előállított 220 mg terméket 15 ml 80%-os ecetsavban oldjuk és 20 mg 10%-os palládium-25 -csontszén jelenlétében hidrogénezzük. A hidrogénezés befejezése után a katalizátort leszűrjük és az oldatot szárazra pároljuk. Az ecetsav eltávolítására a kapott 210 mg maradékot 15 ml vízzel telített n-butanolban oldjuk, és az oldatot hígított nátrium-hidrogén-karbo-30 nát-oldattal, majd többször vízzel mossuk. A butanolos fázis szárazra történő bepárlásával 202 mg címben megadott, ecetsavmentes peptidet kapunk. Vékonyréteg-kromatográfia szilikagél-lemezen: Rj(96) = 0,40; Rf (43C)=0,32. p) Boc—Cys—Gly—Asn—Leu—Ser(tBu)—Thrí (tBu)—Cys—Met—Leu—Gly—Thr(tBu)—Tyr(tBu)— -Thr(tBu)—Gin—Asp(OtBu)—Phe—Asn—Lys(Boc)— —Phe—His—Thr(tBu)—Phe—Pro—Gin—Thr(tBu)— —Asn—He—Gly—Val—Gly—Ala—Pro—NH2 97 mg Boc—Cys—Gly—Asn—Leu—Ser(tBu)—Thr-45 1 -(tBu)—Cys—Met—Leu—Gly—OH, 195 mg o) eljárás szerint előállított peptid, 16 mg N-hidroxi-benztriazol és 3 ml dimetil-formamid elegyéhez 25 mg diciklohexil-karbodiimidet adunk, és nitrogénáramban 5 óra hosz-50 szat 45 °C hőmérsékleten keverünk. A reakcióelegyet ezután 50 ml jéghideg, peroxidmentes éterre öntjük és a finom csapadékot leszűrjük. A terméket kétszer dimetil-formamid és víz elegyből és kétszer dimetil-formamid és etil-acetát elegyből kicsapva tisztítjuk. Az eljá-55 rással 120 mg címben megadott, védett peptidet kapunk. Vékonyréteg-kromatográfia szilikagél-lemezen: Rf(52A)=0,31; Rf(100) = 0,17; Rf(107)=0,65. 10. példa Csíramentes körülmények között a következő komponensekből szuszpenziót képezünk (a mennyiségi ada-65 tok egy ampullára vonatkoznak): 17
