171243. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új dotriakontapeptidamidok előállítására
31 171243 32 a) Z—Asn—He—Gly—OMe 9,1 g H—He—Gly—OMe—hidroklorid, 16,3 g Z— —Asn—ONp, 50 ml dimetil-formamid és 4,1 ml N-etil-morfolin elegyét 18 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Az oldat kocsonyásan bedermed, melyhez ezután 300 ml étert adunk, eldörzsöljük, leszűrjük és szárítjuk. Az oldhatatlan port 200 ml vízzel eldörzsöljük, leszűrjük, szárítjuk és etil-acetát és hexán elegyből kikristályosítjuk. Az eljárással 15 g Z—Asn—lie— —Gly—OMe-t kapunk. Olvadáspont: 218—219 °C. b) H—Asn—He—Gly—OMe 14 g Z—Asn—He—Gly—OMe-t 500 ml dimetil-formamidban szuszpendálunk és 1 g 10%-os palládium-csontszénnel hidrogénezünk, miközben a kiindulási anyag feloldódik. A hidrogénezés befejezése után a katalizátort leszűrjük és az oldatot szárazra pároljuk. Az eljárással, kiindulási anyagtól mentes 9,7 g H—Asn— —Ile—Gly—OMe-t kapunk. c). Z—Thr(tBu)—Asn—Ile—Gly—OMe 9,5 g H—Asn—Ile—Gly—OMe, 80 ml dimetil-formamid és 13,6 g Z—Thr(tBu)—OSu elegyét 18 óra hosszat 25 °C hőmérsékleten állni hagyjuk, miközben az elegy teljesen megszilárdul. Az elegyet 300 ml éter hozzáadásával eldörzsöljük, leszűrjük és szárítjuk, majd 200 ml vízzel ismét eldörzsöljük, leszűrjük és szárítjuk. A maradékot etanolból átkristályosítjuk. Kitermelés 12,4 g. Olvadáspont: 207—208 °C. d) H—Thr(tBu)—Asn—Ile—Gly—OMe 11,0 g Z—Thr(tBu)—Asn—Ile—Gly—OMe-t 500 ml dimetil-formamidban melegítéssel oldunk és 1 g 10%-os palládium-csontszén jelenlétében hidrogénezünk. A hidrogénfelvétel befejezése után a katalizátort leszűrjük és az oldatot szárazra pároljuk. Az eljárással 8,0 g H— —Thr(tBu)—Asn—He—Gly—OMe-t kapunk. Vékonyréteg-kromatográfiaszilikagél-lemezen Rf (43A) = 0,12; R f =0,28 kloroform—metanol (70:30) rendszerben. e) Z—Gin—Thr(tBu)—Asn—Ile—Gly—OMe 7,5 g H—Thr(tBu)—Asn—Ile—Gly—OMe-t 100 ml dimetil-formamidban oldunk és 7,7 g Z—Gin—ONp-t adunk hozzá. A reakcióelegy lassan szilárd masszává áll össze. Szobahőmérsékleten tartva, 18 óra után az anyaghoz 375 ml étert adunk, alaposan eldörzsöljük, leszűrjük, szárítjuk, majd 250 ml vízzel ismét eldörzsöljük, szűrjük és szárítjuk. Az anyagot trifluor-etanol és víz elegyből kicsapva 11 g terméket kapunk. Olvadáspont: 275—277 °C. A termék az általában használt szerves oldószerekben igen rosszul oldódik. f) H—Gin—Thr(tBu)—Asn—Ile—Gly—OMe 8,5 g Z—Gin—Thr(tBu)—Asn—He—Gly—OMe-t 500 ml dimetil-formamidban szuszpendálunk és 1,5 g 16 10%-os palládium-csontszén jelenlétében hidrogénezünk. A kezdetben nem oldódó kiindulási anyag feloldódik. A hidrogénezés befejezése után a katalizátort leszűrjük és az oldat bepárlásával 6,5 g H—Gin— 5 —Thr(tBu)—Asn—Ile—Gly—OMe-t kapunk, mint gyantát. Vékonyréteg-kromatográfia szilikagél-lemezen: Rj<43C) = 0,20; Rf{101A) = 0,16. 10 g) Z—Thr(tBu)—Phe—Pro—Gin—Thr(tBu)—Asn— —He—Gly—OMe 6.0 g H—Gin—Thr(tBu)—Asn—Ile—Gly—OMe-t 500 ml dimetil-formamidban oldunk, melyhez 5,8 g 15 Z—Thr(tBu)—Phe—Pro—OH-t, 2,3 g N-hidroxi-szukcinimidet és 3 g diciklohexil-karbodiimidet adunk. A reakcióelegyet 16 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük, a képződött diciklohexil-karbamidtól leszűrjük, a szűrletet 200 ml térfogatra bepároljuk és 1,5 1 20 éterre öntjük. Az elegyet 3 óra hosszat 0 °C hőmérsékleten állni hagyjuk és ezután a finom csapadékot leszűrjük. A kapott 10 g port 200 ml vízzel eldörzsöljük, leszűrjük és szárítjuk. A kapott 9,6 g nyers terméket további tisztítás céljából előbb etil-acetáttal eldörzsöl-25 jük, szűrjük és szárítjuk, majd acetonban szuszpendáljuk, ismét szűrjük és szárítjuk. A 9,3 g oldhatatlan termék további felhasználáshoz megfelelően tiszta. Vékonyréteg-kromatográfia szilikagél-lemezen: Rf (102A)=0,66. 30 h) Z—Thr(tBu)—Phe—Pro—Gin—Thr(tBu)—Asn— —Ile—Gly—OH 3.1 g Z—Thr(tBu)—Phe—Pro—Gin—Thr(tBu)— 35 —Asn—Ile—Gly—OMe-t melegítés közben 155 ml metanol, 45 ml dioxán és 55 ml víz elegyében oldunk. Az oldatot szobahőmérsékletre hűtjük, 8 ml 1,0 n nátrium-hidroxid-oldatot adunk hozzá és 30 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A reakcióelegyet ezután 0 °C 40 hőmérsékletre lehűtjük, 150 ml jeges vizet és 24 ml 1,0 n sósav-oldatot adunk hozzá, a csapadékot leszűrjük, jeges vízzel mossuk és szárítjuk. Az eljárással 2,56 g port kapunk, mely vékonyréteg-kromatográfia szerint egységes. 45 Rf(45) = 0,21 ;Rf (100) = 0,19. c) H—Thr(tBu)—Phe—Pro—Gin—Thr(tBu)— —Asn—He—Gly—OH 50 2,37 g Z—Thr(tBu)—Phe—Pro—Gin—Thr(tBu)— —Asn—He—Gly—OH-t 60 ml 80%-os ecetsavban oldunk és 200 mg 10%-os palládium-csontszén jelenlétében hidrogénezünk. A hidrogénezés befejezése után a katalizátort leszűrjük, a szűrletet bepároljuk és szárít-55 juk. Az eljárással 2,28 g gyantát kapunk, mely vékonyréteg-kromatográfia szerint nem hidrogénezett kiindulási anyagot nem tartalmaz. Rf (52) = 0,21; Rf(107)=0,55. 60 k) Z—Asn—Lys(Boc)—Phe—His—Thr(tBu)— —Phe—Pro—Gin—Thr(tBu)—Asn—Ile—Gly—OH 1,41 g Z—Asn—Lys(Boc)—Phe—His—NHNH2-t 20 ml dimetil-formamidban oldunk, az oldatot — 30 °C 65 hőmérsékletre hűtjük, melyhez 1,5 ml 3,2 n sósav-olda-
