171243. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új dotriakontapeptidamidok előállítására
171243 25 26 A k) eljárás szerint előállított 7,05 g terméket 400 ml 80%-os ecetsavban 1 g 10%-os palládium-csontszén jelenlétében hidrogénezzük. A kapott termék 6,6 g. DS: Rf(96) = 0,35; Rf (121) = 0,72; R f (45) = 0,27. m) Z—Thr(tBu)—Tyr(tBu)—Thr(tBu)—Gin— —Asp(OtBu)—Phe—Asn—Lys(Boc)—Phe— —His—Thr(tBu)—Phe—Pro—Gin—Thr(tBu)— —Ala—Thr(tBu)—Gly—Val—Gly—Ala—Pro— —NH2 565 mg Z—Thr(tBu)—Tyr(tBu)—Thr(tBu)—Gin— —Asp(OtBu)—Phe—NH—NH2 -t (Helv. Chim. Actából már idézett rész) 80 °C hőmérsékleten 4 ml dimetil-formamidban oldunk, az oldatot —20 °C hőmérsékletre lehűtjük, melyhez 0,35 ml 3,7 n sósavas dioxánt és 0,067 ml terc-butil-nitritet adunk. A reakcióelegyet 10 percig —15 °C hőmérsékleten keverjük, majd 600 mg H—Asn—Lys(Boc)—Phe—His—Thr(tBu)—Phe— —Pro—Gin—Thr(tBu)—Ala—Thr(tBu)—Gly—Val— —Gly—Ala—Pro—NH2—acetát és 5 ml dimetil-formamid 0 °C-ra lehűtött oldatát és 0,33 ml N-etil-diizopropil-amint adunk hozzá. A reakcióelegyet 5 percig —15 °C hőmérsékleten keverjük, 23 °C hőmérsékletre felmelegedni hagyjuk és 6 óra hosszat keverjük. Az elegyet ezután 100 ml jeges vízre öntjük, a csapadékot leszűrjük, vízzel mossuk és vákuumban kalcium-kloridon szárítjuk. A tisztításhoz az anyagot metanol és víz elegyből ismételten kicsapjuk és szárítás után acetonnal eldörzsöljük. Az eljárással 650 mg terméket kapunk. DS: Rf(43C) = 0,33; Rf(70) = 0,60. n) H—Thr(tBu)—Tyr(tBu)—Thr(tBu)—Gin— —Asp(OtBu)—Phe—Asn—Lys(Boc)—Phe—His— —Thr(tBu)—Phe—Pro—Gin—Thr(tBu)—Ala— —Thr(tBu)—Gly—Val—Gly—Ala—Pro—NH2 Az m) eljárás szerint előállított 610 mg terméket 25 ml 80%-os ecetsavban palládium-csontszén jelenlétében hidrogénezzük. A terméket 50 ml vízzel telített n-butanolban oldjuk, az oldatot az ecetsav eltávolítására kétszer, hígított nátrium-karbonát-oldattal, majd kétszer félig telített nátrium-klorid-oldattal, és végül vízzel mossuk. A butanolos fázist bepárolva 605 mg színtelen, habos terméket kapunk. DS: RK100) = 0,20; Rf(96) = 0,40. o) Boc—Cys—Gly—Asn—Leu—Ser(tBu)—Thr(tBu)—Cys—Met—Leu—Gly—Thr(tBu)—Tyr(tBu)— —Thr(tBu)—Gin—Asp(OtBu)—Phe—Asn—Lys(Boc) Phe—His—Thr(tBu)—Phe—Pro—Gin—Thr(tBu)—Ala—Thr(tBu)—Gly—Val—Gly—Ala—Pro— —NH2 605 mg H—Thr(tBu)—Tyr(tBu)—Thr(tBu)—Gin— —Asp(OtBu)—Phe—Asn—Lys(Boc)—Phe—His— —Thr(tBu)—Phe—Pro—Gin—Thr(tBu)—Ala—Thr(tBu)—Gly—Val—Gly—Ala—Pro—NH2, 290 mg Boc—Cys—Gly—Asn—Leu—Ser(tBu)—Thr(tBu)— —Cys—Met—Leu—Gly—OH dekapeptid [Helv. 53, 556 (1970)], 46 mg l-hidroxi-benzotriazol és 10 ml dimetil-formamid elegyéhez 75 mg diciklohexil-karbodiimidet adunk, a reakcióelegyet 90 percig 40 °C hőmérsékleten és 18 óra hosszat 23 °C hőmérsékleten keverjük, majd a kicsapódott diciklohexil-karbamidot leszűr-5 jük, a szűrletet 100 ml jéggel hűtött, peroxidmentes éterre öntjük, a csapadékot leszűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. A kapott termék előtisztítására az anyagot kétszer dimetil-formamid és éter, majd kétszer dimetil-formamid és víz elegyből ismételten kicsapjuk. A ki-10 csapott terméket ellenáramban több mint 300 szakaszban extraháljuk (oldószerrendszer: 3,66 1 metanol, 1 liter puffer, 21 kloroform, 2,32 1 szén-tetraklorid; puffer: 29 ml jégecet és 19 g ammónium-acetát 1 liter vízben). A tiszta anyagot a 123—137 számú frakciókból kapjuk, 15 eloszlási szám K = 0,76. DS: Rf (100) = 0,32; R f (52A) = 0,41. 7. példa H—Cys—Gly—Asn—Leu—Ser—Thr—Cys—Met— —Leu—Gly—Thr—Leu—Thr—Gin—Asp—Phe— —Asn—Lys—Phe—His—Thr—Phe—Pro—Gin— 25 —Thr—Ala—Thr—Gly—Val—Gly—Ala—Pro— —NH2—acetát (Leu12 —Thr 27 —kalcitonin M acetát) 490 mg Boc—Cys—Gly—Asn—Leu—Ser(tBu)— —Thr(tBu)—Cys—Met—Leu—Gly*-Thr(tBu)—Leu— —Thr(tBu)—Gin—Asp(OtBu)—Phe—Asn—Lys(Boc)—Phe—His—Thr(tBu)—Phe—Pro—Gin— —Thr(tBu)—Ala—Thr(tBu)—Gly—Val—Gly—Ala— 35 —Pro—NH2-t 12 ml 90%-os jéghideg trifluor-ecetsavba adunk, nitrogénárammal kiöblítjük és szobahőmérsékletre melegítjük. A reakcióelegyet 90 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd ismét 0 CC hőmérsékletre hűtjük, 150 ml jéggel hűtött, peroxidmentes étert 40 adunk hozzá, 2 óra hosszat 0 °C hőmérsékleten állni hagyjuk, a csapadékot leszűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. A trifluor-ecetsav eltávolítására az anyagot 15 ml 5%-os ecetsavban oldjuk és Merck-féle ioncserélő II. sz. (gyengén bázisos, acetátforma) gyantával töltött osz-45 lopon szűrjük. Az oszlopot háromszor egyenként 10 ml 5%-os ecetsavval mossuk és az egyesített eluátumot liofilizáljuk. Az eljárással 432 mg Leu12—Thr 27 —kalcitonin M acetátot kapunk, mely színtelen, könnyű por. DC:Rf(101A) = 0,50; 50 DA: Rj(52) = 0,45. Vékonyréteg-elektroforézis cellulózlemezen: pH 1,9; 280 volt; 2 óra; futási távolság a katódhoz: 4,5 cm. A kiindulási anyagot a következő módon állíthatjuk elő: 55 a) Z—Thr(tBu)—Leu—Thr(tBu)—Gin—Asp(OtBu)—Phe—NH—NH2 12,7 g H—Leu—Thr(tBu)—Gin—Asp(OtBu)—Phe— 60 —OMe-t 100 ml dimetil-formamidban oldunk, 9,0 g Z—Thr(tBu)—OSu-t adunk hozzá és 17 óra hosszat 25 °C hőmérsékleten állni hagyjuk. Az anyagot víz hozzáadásával kicsapjuk, leszűrjük, szárítjuk és etil-acetátból átkristályosítjuk. Kitermelés 14,2 g; további tisztí-65 tásra metanol és víz elegyből ismét kicsapjuk. 13
