171199. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2-amino-4-hidroxi -7,8-dihidro-pteridinek előállítására
15 171199 16 mossuk, és a benzolt elöntjük. A szilárd anyagot etanolból átkristályosítjuk. 7,8 g (50%) 3-amino-l-hidroxi-3-spiro-ciklohexil-2-hidroxiimino-propán-hidrokloridot kapunk. A színtelen, kristályos termék 197 C°-on olvad. (e)2-Ammo-4-hidroxi-6-(3-hidroxi-2-hidroxiimino-l-spiro-ciklohexil-propilamino)-5-nitro-pirimidin előállítása (II általános képletű vegyület, 10 R = CH2OH, R 1 + R 2 = spiro-ciklohexil, Z= hidroxiimino) 2,3 g 2-amino-4-klór-6-hidroxi-5-nitro-pirimidin (III általános képletű vegyület, Hal = klór) vízmentes eta- 15 nollal készített szuszpenziójához 2,5 g 3-amino-l-hidroxi-Z-hidroxiimino-3-spiro-ciklohexil-propán-hidrokloridot és 2,7 g vízmentes trietilamint adunk, és a reakcióelegyet 7 órán át visszafolyatás közben forraljuk. A reakcióelegyet szűrjük, és a szilárd anyagot forró 20 etanollal mossuk. A szűrletet bepároljuk, és a sárga, olajos maradékot hideg vízzel eldörzsöljük. A kivált sárga szilárd anyagot csontszenes derítés közben vízből átkristályosítjuk. 1,85 g (47,4%) 2-amino-4-hidroxi-6--(3-hidroxi-2-hidroxiimino-l-spiro-ciklohexil-propil- 25 amino)-5-nitro-pirimidint kapunk. A fehér, porszerű termék 300 C° fölött olvad bomlás közben. (38%) halványsárga, kristályos szilárd anyagot kapunk, amely 300 C°-nál magasabb hőmérsékleten bomlás közben olvad. 3. példa Az (I) általános képletű vegyületek pteridin-antagonista hatásának meghatározása során a vegyületek hidroximetil-dihidropteridin-pirofoszfokináz-enzimre (HMPPS) és dihidropteroát-szintetáz enzimre („szintetáz") kifejtett gátló hatását vizsgáljuk. E két enzim döntő szerepet tölt be a DPtA bioszintézisében. A bioszintézis során a következő reakciók zajlanak le: (a) HMPPS: Mg2+ HMPt + ATP ~^=^- Pt + AMP (b) Szintetáz: Mg2+ Pt+pAB^=± DPtA + pirofoszfát (f) 2-Amino-4-hidroxi-6-hidroximetil-7-spiro- 30 I. -ciklohexil-7,8-dihidro-pteridin előállítása (I általános képletű vegyület, R =CH2OH, R 1 + R 2 = II. = spiro-ciklohexil) 500 mg 2-amino-4-hidroxi-6-(3-hidroxi-2-hidroxiimi- 35 no- l-spiro-ciklohexil-propilamino)-5-nitro-pirimidint III. gőzfürdőn, melegítés közben csekély mennyiségű 0,1 IV. mólos nátriumhidroxid-oldatban oldunk. Az oldathoz addig adunk részletekben nátrium-ditionitot, amíg csak- V. nem teljesen színtelen elegyet nem kapunk. A hűtés 40 VI. hatására kivált terméket leszűrjük, tisztítás céljából VII. 2 mólos sósavoldatban oldjuk, és a bázist 0,88 mólos VIII. ammóniaoldattal pH = 8 értéken kicsapjuk. Az elegyet állni hagyjuk, majd a terméket elkülönítjük. 150 mg IX. (a) A HMPPS-gátló hatás vizsgálata során azt mérjük, hogy milyen mértékben épül be az ATP-y-P32 terminális foszfát-csoportja a „dihidropteridinbe." A méréseket a hatóanyag jelenlétében, illetve hatóanyagmentes közegben végezzük. A kísérletekhez 12 kémcsövet használunk fel, az egyes kémcsövekbe az 1. táblázatban megadott mennyiségű anyagokat töltjük. Az 1. táblázat jelölései a következők: 800 [Amól koncentrációjú 2-amino-4-hidroxi-6--hidroximetil-7,8-dihidro-pteridin (HMPt) oldat Escherichia coli extraktumból elkülönített, Sephadex G—100 ioncserélő oszlopon szintetáz-mentesített HMPPS-forrás [Richey és Brown: J. Bk>l. Chem. 244, 1582—1592 (1969)]. 3 mmól koncentrációjú ATP-y-P32 oldat 0,10 mól koncentrációjú semlegesített, jelzetlen ATP oldat 0,02 mól koncentrációjú MgCl2 .6H 2 0 oldat 0,1 mól koncentrációjú MgCl2 .6H 2 0 oldat HMPPS és „szintetáz"-forrás Vizsgálandó vegyület 0,93 X 10~3 mól koncentrációban 0,4 mmól koncentrációjú pAB-C14 oldat l. táblázat VIII. száma i. ii. m. IV. v. VI. VII. végső ko9«. IX. í lOOfxI 15 [Al 10 [Al _ 2 5[A1 100 [xl 15 [Al — 10 [Al — — — — 3 5 [Al 100 [Al 15 [Al — 10 [Al — — — — 4 5(j.l 100 [xl 15 [Al — 10 [Al — — 2,5 X 10~6 mól — 5 5 [xl 100 [Al 15 [Al — 10 [Al — — 2,5 X 10~6 mól — 6 5 [A! 100 [Al 15 [Al — 10 [Al — — 1,0 X 10"5 mól — 7 5[A1 100 [Al 15 [Al — 10 [Al — — l,0X10^5 mól — 8 5 [Al 100 [Al 15 [Al — 10 [Al — — 9,3 X 10~5 mól — 9 5[A1 100 [Al 15 [Al — 10 [Al — — 9,3 X 10~5 mól — Kontroll 10 — 11 5 [Al 12 5 [Al 10 [Al — 10 [Al 20 [Al 10 [Al — 10 [Al 20 [Al 10 [Al — 10 [Al 20 [Al l,0X10-5 mól 10 [Al 10 [Al 10 [Al
