170786. lajstromszámú szabadalom • Eljárás MM-13902 antibiotikum-sók előállítására
13 170786 14 6. példa 7. példa Az 1 363 075 sz. brit szabadalmi leírás szerinti terméket tartalmazó szűrt fermentlé ionpár-extrakciója 5 10 liter, a 3. példa szerint előállított, szűrt fermentléhez 248 g nátriumszulfátot, majd az oldathoz 10 liter 2%-os diklórmetanos tetra-n-butil-ammónium-hidrogénszulfát oldatot adunk, és a rendszert 30 percig ke- 15 verjük. A fázisokat elválasztjuk egymástól. A diklórmetanos fázist 2 C°-ra hűtjük, a kis mennyiségű szuszpendált vizet Whatman No. 1 PS szűrőpapíron kiszűrjük, majd a szűrletet vákuumban, 30 C°-nál alacsonyabb hőmérsékleten 20 ml végtérfogatra bepároljuk. A kon- 20 centrátumhoz 400 ml petrolétert (forráspont-tartomány: 40—60 C°) adunk. Az MM 4550 jelű komplex terméket tartalmazó, gumiszerű anyag válik ki. A gumiszerű anyagot centrifugálással elkülönítjük, 50 ml diklórmetánban oldjuk, és az oldathoz 1 g bá- 25 riumjodid és 1 g báriumkarbonát 50 ml vízzel készített oldatát adjuk. Az elegyet 2 percig rázzuk, majd a szilárd anyagot kiszűrjük, és a szűrletből elkülönítjük a vizes fázist. A vizes fázis az MM 4550 jelű komplex terméket báriumsója formájában tartalmazza. A vizes fázis pH-ját 30 6,5-re állítjuk, majd fagyasztva szárítjuk. 317 mg nyers MM 4550 jelű komplex terméket kapunk; I50 = 0,01 (xg/ml. MM 4550 antibiotikumot és MM 13902 antibiotikumot tartalmazó, részben tisztított komplex előállítása tetra-n-butil-ammónium-hidrogénszulfát felhasználásával A 4. példa szerint előállított 12,5 g nyers MM 4550 jelű komplex terméket 125 ml vízben oldjuk, és ezt az oldatot 125 ml 10 vegyes%-os diklórmetanos tetra-n-butil-ammónium-hidrogénszulfát oldattal extraháljuk. A fázisokat elválasztjuk egymástól, majd a diklórmetanos fázist 190 mg nátriumjodidot tartalmazó 100 ml 2 C°-os vízzel extraháljuk. A vizes fázist keverés közben, lassú ütemben 2%-os nátriumhidrogénkarbonát-oldattal pH = 6,4 értékre semlegesítjük, és fagyasztva szárítjuk. A kapott szilárd anyagot acetonnal mossuk. 88 mg terméket kapunk, amely az MM 4550 és MM 13902 antibiotikum sóinak keveréke (Escherichia coli ß-laktamazzal szemben meghatározott l50-érték: 0,0002 \ig). Az antibiotikumok 70%-át különítettük el. A kapott termékhez ampicillint adunk, és a keverék antibakteriális aktivitását tápagaron, sorozathígítási módszerrel vizsgáljuk. Az így meghatározott minimális gátló koncentráció-értékeket a 2. táblázatban közöljük. 2. táblázat A 7. példa szerint előállított termék és ampicillin keverékének antibakteriális hatása Ampicillin és Mikroorganizmus Ampicillin MGK-értéke 0,1 1,0 10,0 Hg/ml antibiotikum-keverék MGK-értéke Escherichia coli Bl 1 >500 >500 500 50 Escherichia coli JT417 250 250 250 50 Escherichia coli JT39 >500 >500 500 25* Shigella sonnei S239 125 125 125 25* Klebsiella aerogenes A 125 25 5* <0,1* Klebsiella aerogenes IP282 50 50 12,5 0,5* Proteus mirabilis 889 >500 >500 50 0,5 Proteus mirabilis 247 >500 125 5,0 0,5 Proteus morganii F 50 50 25 0,5 Proteus rettgeri RÍ 10 250 125 25* 0,25* Staphylococcus aureus (Russell) 250 125 <0,1 0,25 Staphylococcus aureus (Russell H) >500 <0,1 <0,1 <0,1 * Az antibiotikum-keverék a megadott koncentrációkban önmagában adagolva csak részleges gátló hatást fejt ki. Hasonló szinergetikus hatásfokozódást észleltünk, ha a 7. példa szerint kapott antibiotikum-keveréket amoxicillinnel együtt adagoltunk. 8. példa MM 4550 és MM 13902 antibiotikumot tartalmazó, részlegesen tisztított termék előállítása cetil-dimetil-benzil-ammóniumklorid felhasználásával A 4. példában ismertetett módon, Farnell aktív szénoszlopon végzett adszorpcióval, aceton és víz elegyével végzett eluálással és az eluátum fagyasztva szárításával kapott terméket (I50 = 0,02 [xg/ml) desztillált vízben oldjuk. A 13 mg/ml koncentrációjú oldat pH-ját 6,5-re állítjuk. 100 ml így kapott oldatot azonos térfogatú 0,1%-os 55 diklórmetanos cetil-dimetil-benzil-ammóniumklorid oldattal extrahálunk. A fázisokat centrifugálással elválasztjuk egymástól, majd a szerves fázist 100 ml 0,05%-os vizes nátriumjodid-oldattal extraháljuk. A fázisokat elválasztjuk egymástól, majd a vizes oldatot a 60 diklórmetán nyomainak eltávolítása érdekében 10 percig csökkentett nyomáson tartjuk. A vizes oldatot fagyasztva szárítjuk, és a kapott terméket 3 X 50 ml acetonnal mossuk. A mosott terméket vákuum-exszikkátorban szárítjuk. 4,3 mg halványbarna 65 port kapunk; I50 =0,002 [xg/ml. 7
