170786. lajstromszámú szabadalom • Eljárás MM-13902 antibiotikum-sók előállítására

11 170786 12 szulfát-oldatban oldunk, és az oldathoz 1 liter 2 vegyes %-os diklórmetános töfctra-n-butil-ammónium-hidrogénszulfát-oldatot (az Av B. Astra cég [Sodertalje, Svédország] terméke) adunk. A diklórmetános fázist elválasztjuk, — 70 C°-ra hűtjük, a kivált jeget kiszűrjük, és 5 a szűrletet 20 ml végtérfogatra bepároljuk. A koncentrátumhoz 400 ml petrolétert (forráspont-tartomány: 40—60 C°) adunk, és a kivált csapadékot centrifugálással elkülönítjük. A csapadékot 10 ml diklórmetánban oldjuk, és az oldatot 80 mg báriumjodid és 70 mg bari- 10 umkarbonát 10 ml vízzel készített oldatával extraháljuk. A vizes fázist elkülönítjük, szűrjük, és a szűrlet pH-jáí 6,5-re állítjuk. A kapott oldatot fagyasztva szárítjuk. A sárga, porszerű termékből acetonos mosással eltávolítjuk a bariumjodidot, majd a halványsárga, szilárd 15 anyagot centrifugálással elkülönítjük, és vákuumban szárítjuk. 13 mg terméket kapunk; I50=

0,0004 [J.g/ml. 4. példa 20 Az 1 363 075 sz. brit szabadalmi leírás szerinti terméket tartalmazó szűrt fermentlé adszorpciója szénen A 3. példa szerinti eljárással kapott szűrt fermentlé biológiai aktivitásának vizsgálatakor a következő eredményeket kaptuk: Klebsiella aerogenes növekedését 25 gátló zóna átmérője (agar-diffúziós módszerrel meghatározva): 17 mm; gátló zóna átmérője a KAG-vizsgálat szerint: 38 mm; I50: 1: 100 000 hígításban. 170 liter derített, szűrt fermentlevet 5 C°-ra hűtünk, és a fermentlevet alulról felfelé, 800—1000 ml/perc sebesség- 30 gel egy 23 cm átmérőjű, aktív szénnel 40,6 cm magasságig megtöltött oszlopon bocsátjuk át. Az oszlopot 60—80 mesh szemcseméretű „Farnell BO" aktív szénnel (gyártja a Deaborn Chemicals Ltd., Widnes, Nagy-Britannia) töltjük meg, és a fermentlé bevezetése előtt 35 az oszlopot 1 n vizes sósavoldattal mossuk és pH = 6 értékű foszfátpuffer-oldattal pufferoljuk. A szénoszlopot 10 liter ionmentes vízzel mossuk, majd 20 C°-on 20% acetont tartalmazó vízzel eluáljuk. Az aktív frakciókat egyesítjük, a 10 liter térfogatú oldatot vákuumban, 40 30 C°-nál alacsonyabb hőmérsékleten 6 liter végtérfogatra bepároljuk, és a koncentrátumot fagyasztva szárítjuk. 282 g nyers MM 4550 jelű komplex terméket kapunk, amelynek I50-értéke 0,05 pig/ml. A gátló akti- 45 vitásértékek összehasonlítása alapján a termék 22%-át különítettük el. Hasonló eredményt érünk el, ha a fenti eljárásban aktív szénként „Darcogranular carbon" kereskedelmi nevű terméket (gyártja a Honeywill-Atlas Ltd., Carshalton, Nagy-Britannia) használunk fel. 5. példa Az 1 363 075 sz. brit szabadalmi leírás szerinti terméket tartalmazó szűrt fermentlé adszorpciója ioncserélő gyantán 1 cm belső átmérőjű oszlopba 6 cm magasságig (ágytérfogat: 4,7 ml) 20—50 US mesh szemcseméretű, kloridformájú Dowex 21K ioncserélő gyantát (bázikus csoportokat hordozó polisztirol-divinilbenzol gyanta, a B. D. H. Chemicals Ltd., Poole, Nagy-Britannia cég gyártmánya) töltünk. A gyantaoszlopot körülbelül 4X4,7 ml 5%-os vizes metanollal, majd 4,7 ml desztillált vízzel mossuk. Ezután az oszlopon 2 liter, lényegében a 3. példa szerinti előállított szűrt fermentlevet bocsátunk át, majd a gyantaoszlopot a szennyezőanyagok eltávolítása céljából 50%-os vizes metanollal mossuk. Az MM 4550 jelű komplex terméket 5% nátriumkloridot tartalmazó 50%-os vizes metanollal oldjuk le a gyantáról. A kromatografálás eredményét az 1. táblázatban adjuk meg. A szűrt fermentlé MM 4550 komplex-tartalmát önkényesen 8 egység/ml-nek tekintettük, és ehhez az adathoz viszonyítva adtuk meg az egyes eluátumfrakciók MM 4550 komplex-tartalmát. Az eluátumfrakciók antibakteriális aktivitását Klebsiella aerogenes vizsgálati mikroorganizmussal szemben határoztuk meg az agar-diffúziós módszer szerint. A zónaátmérő — koncentráció (egység/ml) kalibrációs görbe felvételéhez a hígított szűrt fermentlevet használtuk fel. Az 1. táblázat adataiból megállapítható, hogy a Dovex 21K ioncsrélő gyanta igen előnyösen használható fel az MM 4550 jelű komplex termék koncentrálására. A 2—5. frakcióból elkülönített anyag antibakteriális aktivitása a kiindulási anyag aktivitásának 60%-át teszi ki. Az oszlopra felvitt 35 g szilárd anyagból körülbelül 210 mg antibakteriális hatású koncentrátumot különítünk el. 1. táblázat Minta pH Térfogat (ml) Koncentráció egység/ml Egység összesen Szűrt fermentlé 6,5 1970 8 15 760 1. perkolátum 6,9 550 <1 <100 2. perkolátum 7,0 525 <1 <100 3. perkolátum 7,0 595 <1 -<100 4. perkolátum 7,0 300 <1 <100 1. eluátum 7,8 7,0 84 588 2. eluátum 7,8 7,0 328 2 296 3. eluátum 7,7 8,5 440 3 740 4. eluátum 7,7 10,0 320 2 200 5. eluátum 7,6 11,5 160 1840 6. eluátum 7,5 11,0 80 880 7. eluátum 7,6 14,2 66 937 8. eluátum 7,6 20,0 33 660 Összesen 13 141