170670. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptid-peptidohidroláz-típúsú proteolitikus enzimek mennyiségének meghatározására, és eljárás a reagensek előállítására

17 17067° 18 végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 1,25 g (96,0%) (XVIa) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: P! elegy) egységes. Op.: 198—204 °C; MD = +4,2° (c = 1, dimetilformamidban). b) lépés: Cbo-Phe-Phe-Arg(N02)-pNA (XVIb) Kiindulási anyagként 0,9 g (1,45 mmól) (XVIa) képletű vegyületet és 0,737 g (1,74 mmól) Cbo-Phe-OpNP-t használunk. A reakciót az 1. példa b) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 635 mg (58%) (XVIb) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pt elegy) egységes. Op.: 201—203 °C, [«]% = - 23,0° (c = 1,0, dimetilformamidban). c) lépés: H-Phe-Phe-Arg-pNA.2HCl(XVI) Kiii%ulási anyagként 196,9 mg (0,257 mmól) (XVIb) képletű vegyületet használunk. A reakciót az 1. példa g) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket 50%-os ecetsavban, Sephadex G—-25 gélen szűrjük. Az eluátumot fagyasztva szárítjuk. 75,8 mg (46%) amorf, 10,65% klórtartalmú (XVI) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: A elegy) egységes. [a&3 = -6,7° (c=0,65, 50%-os ecetsavban). Aminosav-elemzés eredménye: Phe: 2,0; Arg: 1,1. 17. példa N"-Bz-Phe-Phe-Arg-pNA.HCl (XVII) a) lépés: N"-Bz-Phe-Phe-Arg(N02)-pNA (XVIIa) Kiindulási anyagként 250 mg (0,325 mmól) (XVIb) képletű vegyületet és 90 mg (0,312 mmól) Bz2

0-t használunk. A reakciót az 1. példa d) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 220 mg (92%) amorf (XVIIa) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pj elegy) egységes. MD = - 36,6° (c =0,95, dimetilformamidban). b) lépés: N<*-Bz-Phe-Phe-Arg/pNA.HCl (XVII) Kiindulási anyagként 114,6 mg (0,156 mmól) (XVIIa) képletű vegyületet használunk. A reakciót az 1. példa g) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket 50%-os ecetsavban, Sephadex G—25 gélen szűrjük. Az eluátumot fagyasztva szárítjuk. 77,4 mg (68%) amorf, 4,81% klórtartalmú (XVII) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: A elegy) egységes. [a]^=—25,5° (c=0,72, 50%-os ecetsavban). Aminosav-elemzés eredménye: Phe: 2,0; Arg: 0,97. 18. példa H-D-Phe-Val-Arg-pNA.2HCl (XVIII) a) lépés: Cbo-D-Phe-Val-Arg(N02)-pNA (XVIIIa) Kiindulási anyagként 480 mg (0,83 mmól) (Ib) képletű vegyületet és 530 mg (1,25 mmól) Cbo-D-Phe-OpNP-t (op.: 126,2—126,6 °C; [<*]£ = +24,75° (c = 1,0, dimetilformamidban) használunk. A reakciót az 1. példa b) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 587 mg (98%) amorf (XVIIIa) képletű vegyületet ka-5 punk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pl elegy) egységes. [a]g = +18,9° (c=2,0, dimetilformamidban). b) lépés: H-D-Phe-Val-Arg-pNa.2HCl (XVIII) 10 Kiindulási anyagként 153,8 mg (0,212 mmól) (XVIIIa) képletű vegyületet használunk. A reakciót az 1. példában leírt módon végezzük. A nyers terméket 20%-os ecetsavban, Sephadex G—15 gélen szűrjük. Az eluátumot 15 fagyasztva szárítjuk. 36,3 mg (28%) amorf, 11,34% klórtartalmú (XVIII) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: A elegy) egységes. [a]|,3 = -70,3° (c

=0,61, 50%-os ecetsavban). Aminosav-elemzés eredménye: Val: 1,0; Phe: 1,1; 20 Arg: 1,0. 19. példa 25 N"-Bz-D-Phe-Val-Arg-pNA. HCl (XIX) a) lépés: N«-Bz-D-Phe-Val-Arg(N02)-pNA (XIXa) 30 Kiindulási anyagként 244 mg (0,34 mmól) (XVIIIa) képletű vegyületet és 92 mg (0,41 mmól) Bz2

0-t használunk. A reakciót az 1. példa d) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 181 mg (77%) (XIX) képletű 35 vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: Pt

elegy) egységes, [a]" = —1,36° (c =0,8, dimetilformamidban); op.: 211—-215 °C. b) lépés: N«-Bz-D-Phe-Val-Arg-pNA.HCl (XIX) 40 Kiindulási anyagként 128,3 mg (0,186 mmól) (XIXa) képletű vegyületet használunk. A reakciót az 1. példa g) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket 5%-os ecetsavban, Sephadex G—25 gélen szűrjük. Az eluátu-45 mot fagyasztva szárítjuk. 103,8 mg (81%) amorf, 5,15% klórtartalmú (XIX) képletű vegyületet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószer: A elegy) egységes, [ag,3 = -36,9° (c =0,68, 50%-os ecetsavban). Aminosav-elemzés eredménye: Val: 1,0; Phe: 0,9; 50 Arg: 0,9. 20. példa 55 H-Tyr-Val-Arg-pNA.HCl(XX) a) lépés: Cbo-Tyr-(OBz)-Val-Arg(N02)-pNA (XXa) Kiindulási anyagként 480 mg (0,83 mmól) (Ib) kép-60 létű vegyületet és 660 mg (1,25 mmól) Cbo-Tyr(OBz)-OpNP-t [(op.: 147,5—149,0 °C, [aß

5 = -8,5° (c =2,0, dimetilformamidban)] használunk. A reakciót az 1. példa b) lépésében leírt módon végezzük. A nyers terméket metanolban, Sephadex LH—20 gélen szűrjük. 65 460 mg (65%) amorf (XXa) képletű vegyületet kapunk, 9